促进植物乳杆菌T-Ⅲ在脱脂乳中生长营养因子的研究.pdfVIP

摘要 摘要 植物乳杆菌常存在于发酵的蔬菜和果汁中，大多数菌株可以从发酵的植物性产品和 青贮饲料中分离得到，也是人体肠道主要的微生物。在人体肠道中，植物乳杆菌通过与 病原菌竞争限制性营养素，抑制病原菌的生长，调节肠道微生态的组成，形成生物学屏 障。同时，植物乳杆菌通过产生有机酸、细菌素、过氧化氢以及双乙酰等代谢产物抑制 其它细菌，调节肠道微生物菌群的组成，增强机体的免疫力，降低胆固醇水平，缓解乳 糖不耐症及抑制肿瘤细胞的形成。植物乳杆菌ST．ⅡI(CGMCCNo．0847)是一株具有降 低血清胆固醇能力的益生菌，前期研究结果表明，其在脱脂乳中生长缓慢、产酸能力弱。 为了揭示影响植物乳杆菌ST．III在脱脂牛乳中生长的机理，本文对其生长限制因子进行 了初步的探索。 首先，考察了多种碳源、氮源以及维生素等营养因子对其生长的影响。实验结果表 明，在脱脂乳中添加碳源、维生素、氨基酸对其生长及凝乳无显著影响；添加鱼蛋白胨 cfu／mL，最高滴定酸度为60oT并使脱脂乳凝乳(37℃恒温培养17h)。因此，我们推 测鱼蛋白胨中可能存在促进植物乳杆菌ST．III在脱脂乳中生长的营养因子。 鱼蛋白胨经过分子截留极限为5000Da的膜超滤后，透过液保留促进植物乳杆菌 G．15凝 G．25和Sephadex ST．III在脱脂乳中生长和凝乳的作用。该透过液经过Sephadex 胶柱分离后，检测洗脱液在220 llnl处的光吸收，获得一个可以促进植物乳杆菌ST-Ill 在脱脂乳中生长和凝乳的组分B33。 将组分B33冷冻干燥处理后进行红外光谱扫描，组分B33在C．O键特征峰位表现 较弱吸收，初步判断组分B33为非多糖物质。谱图中NH”的伸缩振动、COO。伸缩振动、 N．H伸缩振动与弯曲振动、N．H和O．H的伸缩振动等特征吸收具有显著的肽类物质的 特征，初步推断组分B33中促进植物乳杆菌ST一ⅡI在脱脂乳中凝乳的物质是肽类物质。 其次，LC．MS分析检测出八种多肽组成。 21 最后，选取一株凝乳性较好的植物乳杆菌CZ 12作为参照，对植物乳杆菌ST．III 2112 蛋白酶活进行研究。植物乳杆菌ST—III蛋白酶活及蛋白水解能力比植物乳杆菌CZ 低，而氨肽酶和羧肽酶活性与之差异较少，因此我们可以推测植物乳杆菌ST．III在脱脂 乳中不能很好生长和凝乳的原因是该菌株蛋白酶活性较低，在生长初期时不能很好利用 外源蛋白质营养。而添加鱼蛋白胨等促进生长后，植物乳杆菌ST．III可以将蛋白质、多 肽水解成一系列的寡肽或氨基酸，从而满足菌体生长的氮素营养。 关键词：植物乳杆菌，生长限制因子，脱脂乳，蛋白酶 Abstract Abstract Lactobacillus Lactobacillusinthehuman plantarum，apredominent species alsobeisolatedwith fromitsnatural gasrointestinaltract，could highfrequency habitat，i．e． fermented suchas and acandidate plantproductspicklessilage．As could hostintestinalmicrobialbalance the ofthe plantarumadjust