南极中度嗜盐菌盐单胞菌Nj223四氢嘧啶生物合成基因ectABC的克隆及功能初步的研究.pdfVIP

摘要 南极普里兹湾特定的地理环境和海底地形特点，能够长久保持高盐、低温、 高海水密度等特点，其海底沉积物的微生物往往具有适应特殊环境的生理学上的 特异性。其特定的生态环境蕴藏着独特而又极其丰富的微生物资源，其中大部分 还鲜为人知，这为研究中度嗜盐菌盐适应机制开辟了一个崭新的平台。 sp．Nj223)进行分类鉴定并分析其主要累积的相容性溶质种类及浓度。Nj223主 嘧啶合成基因ectABC的蛋白氨基酸的保守序列，设计了多对引物，以该菌株基 基因的部分序列。经过多次PCR和反向PCR，最终获得了一个全长2826bp的 DNA片段。初步分析该片段含有编码四氢嘧啶生物合成途径中的三个酶的基因， ectA、ectB、ectC及上下游序列。 为了研究该基因簇的功能，构建含ectABC编码基因的重组质粒 pET-28a(+)．ectABC，转化E．coli 切，测序结果表明pKS002中重组质粒确实含有ectABC编码基因。观察到该重 组子pKS002在基本培养基M63中耐盐能力得到提高。进一步分析，提取该重 组子细胞内的相容性溶质，HPLC分离纯化后”CNMR检测到四氢嘧啶的波峰， 说明了该菌株是由于合成了四氢嘧啶提高了其耐盐能力。 对ectA、ectB、ectC进行克隆及诱