酶工程亲和层析创新.pptVIP

五、 亲和层析 由吸附层析发展起来的 ，是从复杂混和物中纯化蛋白质的最好方法。 又称： 功能层析（function chromatography） 生物专一吸附（biospecific adsorption）选择层析（selective chromatography） 7. 亲和层析方法 根据欲分离组分与配基的结合特性, 亲和层析可以分为： 共价亲和层析 疏水层析 金属离子亲和层析 免疫亲和层析 染料亲和层析 凝集素亲和层析 (1) 共价亲和层析 共价亲和层析是生物大分子中的功能性基团与层析剂上配基形成可逆性的共价键的一种分子分离方法。 具有共价反应活性的巯基亲和层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖凝胶为母体。通过溴化氰( BrCN ) 活化, 先后用谷胱甘肽及2’,2’ -吡啶基二硫基化合物处理, 而得到谷胱甘肽型巯基层析剂。 (2) 疏水层析 酶蛋白通常含有疏水性较强的氨基酸, 如亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸等。采用氨基烷烃与BrCN 活化的琼脂糖进行反应, 就可形成改性的琼脂糖。酶蛋白可以与亲和层析剂上改性琼脂糖的烷基发生疏水结合反应, 而得以分离。 将一系列长度不同的碳氢化