酶组织化学概论创新.pptVIP

根据偶联的时间不同，将偶氮色素法分为两种。 1）同时偶联法 同时偶联法是在底物混合液中，通过酶的分解作用所得到的沉着物，立即形成重氮化合物和偶氮色素。 2）后偶联法 后偶联法是为了防止重氮盐对酶的抑制作用，先使酶在底物内发生作用，使分解产物沉着，然后再浸渍于重氮盐溶液中，使其形成偶氮色素。 3.色素形成法 （1）四唑盐法 四唑盐法是指含有四唑盐或双四唑盐的底物混合液，在脱氢酶的作用下，从底物分离出来的氢原子与无色的四唑盐或双四唑盐相结合，形成红色或蓝色的甲 （formazan）或二甲 （diformazan）色素。该法主要证明各种脱氢酶。 三、电镜酶组织化学证明法 1．氧化还原酶 （1）四唑盐法 四唑盐是水溶性的，在水溶液中几乎无色，还原后则难溶于水和脂质，变成有色的高电子密度的甲 。现在最常用的四唑盐有NBT和TNBT等。 （2）高铁氰化物还原法 本法是金属盐法的一种，高铁氰化物作为人工受氢体而被使用。高铁氰化物接受由酶作用而游离出来的氢，从而变成亚铁氰化物，此物质不溶于水，并以电子密度高的亚铁氰化铜的形式在酶活性部位被捕捉而沉着。 琥珀酸 ――――――→延胡索酸 琥珀酸脱氢酶 Fe(CN)63- ――――――→ Fe(CN)64- 高铁氰化物