一株腈水合酶产菌发酵条件的优化控制及其酶学性质研究.pdfVIP

摘 要 丙烯酰胺是一种重要的有机化工原料，主要用于合成聚丙烯酰胺。聚丙烯酰 胺作为絮凝剂、增稠剂、增强剂等，广泛应用于造纸、煤炭、地质、冶会、纺织、 化工、食品等许多经济领域，尤其是在石油工业中聚丙烯酰胺的应用更为突出。 丙烯酰胺是以丙烯腈为原料水合而成，从20世纪50年代至今，生产工艺先后经 历了硫酸水合、铜系催化的化学水合两个阶段，而微生物酶催化是第三代最新技 术，其具有高选择性、高活性和高收率的特点。腈水合酶是微生物法生产丙烯酰 胺中起关键作用的生物催化剂，能在常温常压下实现丙烯腈向丙烯酰胺的转化。 SHz—l的发酵优化控制及以游 因此本文对产腈水合酶菌株R^odD∞cc她sp 离细胞液为催化剂对其进行了腈水合酶学性质的研究，取得了以下进展： 1．对SHz．1菌株的生氏特征、生理生化等特性进行了研究。分别利用形态学 和牛理生化方法对其进行鉴定，结果表明该菌属于红球菌。 2．对尺^o出coccwsp．sHz一1菌株的发酵条件进行优化控制。通过腈水合酶生 产菌R^D如∞cc“J spsHz．1菌株的发酵过程研究，阐明了发酵液pH、葡萄糖含 量以及细胞浓度变化与酶活之间的关系。确定了腈水合酶高活力表达的过程，在 发酵过程中调节口H以及补加葡萄糖．C02+，使酶活达到5226U／mL，是对照工艺 (1196．23 u／mL)的4．7信。在确定了pH调控和葡萄糖一c02+耦合补加工艺的基 础卜，通过向培养基中加入诱导剂、表面活性剂等进一步优化了产酶过程。酶活 最高达7009．18u／mL，比优化初始酶活力(5226U／mL)提高了34．12％。 3．研究了温度、pH值、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度等对腈水合酶活性的影 响。结果表明，温度和丙烯酰胺浓度是最主要的影响因素。温度30℃，反应体 系在pH中性范围酶活达到最高。该酶对于底物丙烯腈有很强的耐受性，丙烯腈 浓度为7．2％时，酶活最高；但是产物丙烯酰胺浓度过高，达到40％时就会严重 抑制酶的活性。 关键词：R^D如∞∞甜sp，腈水合酶，发酵条件，优化，酶学性质 Abstract isa11 chemical Ac‘yl锄ideimponam is organic commodiatywhichused mainly for used producing as enhaIlcer- p01”crylamde．Beingnocculallt，thickener，a11d is in polyacryl聊idewidelyapplied papernlaking，ge0109ical drilling，wastewater and chemical food trcatment，textileindustry indust啦and pmcessingetc．，eSpecially in is pe仃oleum Acryl锄ide astherawmaterjal． industry hydratedbyacrylonitrile Sincel950sthe hasbeen