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bt基因与ar基因双价抗虫基因表达载体的构建及转化油菜研究
摘要
本实验将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白的基因(Bacillus
retroflexus
素基(Amaranthus
鳞翅目害虫，又能抗同翅目害虫。将双价基因载体转化油菜。
coli coli
BL2l表达出分子量为
pET-ARA／EBL21表达出分子量为36kDa的特异蛋白，pET-Bt／E
73．7kDa的特异蛋白，与理论计算的分子量大小相符。随着诱导时间的延长，表达蛋白的积累量也增
加。这说明Bt基因和ARA基因在微生物中能够表达，而且阅读框架完整，未发生提前终止现象。
子的35启动子序列，ARA基因表达单元的启动子．BSP为韧皮部特异启动子。经过限制性酶切分析和
PCR鉴定，结果表明含有双价基因的真核重组表达质粒已构建成功。
用农杆菌介导和激光微束穿刺法将双价抗虫基因植物表达载体转化油菜，得到转基因的油菜植
和的条带，初步说明双价抗虫基因已经转入油菜中。Southemblot结果所检测的7个植株有1-2个特
异的杂交带，非转基因植株没有杂交带，阳性对照在预期的位置有两条杂交带。这样初步证明了7
个植株基因组有Bt-BA基因的插入，其插入的拷贝数有的为l，有的为2。对转基因和非转基因植株
进行接虫对比实验，结果显示转基因植株具有一定的抗虫性。
关键词：油菜，苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因，反枝苋菜凝集素基因，原核表达载体，植物表达载
体，农杆菌介导法，激光微束穿刺
Abstract
Bacillus andAmaranthusretroflexus were intobivalent
thuringiesisgene agglutiningene ligated plant
encodetwo and insect-resistance
vector，which lepidopter-resistancecoleopterous proteins．
expression
Thenthenew vectorwstransformedinto the method
plantexpression rapeseedby
TheARA andtheBt were into IPTG
vector,After
gene gene ligatedprokaryotic(pET-28a)expression
Bt afusion withthemolecularof73．7kDaandtheARA
induction,the
geneexpressedprotein weight gene
afusion withthemolecularof36kDaSDSresultis
expressedprotein weight by electrophoresis．The
consentaneouswiththeoritical withthe timewas
compared computation．Alonginducing prolong，the
of Was resultsshowthattheARA andtheBt
expressionproteingraduallyrisingtrend．These gene gene
coul
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