低温诱导烟草早研究与烟草mads-box基因的同源克隆.pdfVIP

摘要 烟草是一种重要的叶用经济作物，在烟叶种植过程中易出现甲-花现象，烟草早花严重影响烟 叶产量和质餐。低温是诱导烟草早花的重要因素之一，到目前为J}：，其相关的早花规律研究结果 意见不一，其分子机制也一直不清楚。本研究利用低温敏感的烤烟品种NC82，通过不同苗期的 10 d)，研究该品种在不同苗期对低温的敏感特性；与此同时，采用RT-PCR 低温诱导处理02c 定量RT-PCR和Real．TimePCR技术对克隆得剑的基冈进行表达分析。该研究具有现实的生产指 导意义，也为培育低温不敏感烤烟品种提供很好的功能基因。具体研究结果如F： (1)NC82的低温诱导结果：移栽后第16d，8叶期低温处理的烟苗首先出现花芽分化迹象， 开始由营养生长向生殖生长转变；移栽后第21d，6叶期和8叶期低温处理的烟苗均出现花芽分 化，其对照均在移栽后第26d左右才出现花芽分化，低温处理分别使其花芽分化提前5d和8d； 移栽后第31d，6叶期和8叶期低温处理的烟卣提前现蕾，其对照在移栽第36d左右才现蕾；低 温处理和对照烟苗的中心花开放时间相差2～3d，均在移栽后的第4549d；4叶期低温处理的 烟苗则相反，其花芽分化、现蕾和中心花开放分别比对照晚lld、18d和16 d。所以6叶期和8 叶期是NC82低温敏感期，低温能促进甲．花，但4叶期易受低温伤害，延迟开花；低温处理烟苗 的花芽分化剑现蕾时间比对照时间长，说明低温延长了花原基的分化过程；而现蕾到开花的天数 波动很大，可能受环境影响很大。 茎尖中成功分离出27条eDNA片段，长度在122146 bp之间。序列分析表明，其中有16条 具有MADSMEF2类保守结构域，与拟南芥等MADS．box基冈家族成员具有很高的同源性， 相似性平均能达到76％，并具有15个保守的氨基酸位点，其中7个位点参与蛋白与DNA的 相互作用，5个位点具有蛋白二聚化功能。系统发育分析发现这16条保守片段分别和拟南芥9 同源异型基冈；AGLl5和彳G￡J2亚家族的基因在茎中也可以表达。 设计引物进行3’RACE和5’全长克隆，选取5’完整的片段A5(805bp)和B1(433bp)，3’RACE的 845 bp)进行烟草FLC类基冈的全长拼接，得到1174 bp全长，以及中间保守序列LyE05(146 bp 的烟草FLC类全长eDNA。戍用NCBI的ORF 位核酸之间，长度615 的表达分析发现NtFLC主要在苇和莩尖中表达，在花和果实中表达颦很少；Real．TimePCR进行 准确定警分析表明NtFLC的表达餐在低温处理后的茎尖中是降低的。所以推测NtFLC可能与 NC82低温敏感，易早花特性相关，在烟草中具有与拟南芥AtFLC相近的功能。 关键词：烟草，低温诱导，早花，MADS．box基冈家族，基冈表达 Abstract actual Tobaccoisall leafeconomic to the important crop，andproneearlyflowering．Inproduction， hasserious ontobaccoleaf and isone earlyflowering impact yieldquality．Low·temperatureimportant influentialfactorfor SO relatedresearchestakedifferent far,the and earlyflowering