低剂量辐射对hw-gs基因转化小麦的影响.pdfVIP

摘要 Y射线照射孕穗期的小麦，开花期利用花粉管通道法将HMW-GS5+10亚基基因 5+10亚基基因。 小麦幼胚后诱导愈伤组织，恢复培养后用基冈枪法导入HMW．GS 5+10基因 目的是利用辐射与遗传转化相结合的方法，将优质蛋白亚基HMW-GS 导入小麦中改良其品质，同时研究低剂量辐射对遗传转化的影u向，确定促进小麦 遗传转化的活体和幼胚的适宜照射剂量。 主要研究结果如下： 对13个基因型的幼胚进行培养效果研究。结果表明，分化率和培养力均存 在基因型差异，而各基因型的出愈率差别不大。农大718、龙麦29和龙麦8培养 力较高，是较理想的转化试材。三种外植体(幼胚、幼穗和成熟胚)培养效果表 明，幼胚、成熟胚的出愈率基本相同，高于幼穗j且差异达极显著。分化率差异 较大，高低趋势为幼胚幼穗成熟胚，培养力大小为幼胚成熟胚幼穗。可见幼 胚是较理想的遗传转化外植体，但选择何种外植体作为试材还应考虑试验条件， 取材方便与否等因素。 以龙辐麦8、龙辐819、龙麦29、东大718、K1122和K234品种(系)的幼 胚为试材，在三种培养基上(MS、2MS和B5，进行培养力的研究。6个品种(系) 在三个培养基上的诱导率在93．98％--100％之间；在MS培养基上6份材料的平 均分化率为26．7％，2MS培养基上为18．3％．而在B5培养基为1．7％。综合出愈 率、分化率情况，对以上6个品种进行幼胚的离体培养，最适宜培养基为MS培 养基。软)c射线照射后对愈伤组织增重量有影响，0．5KRad照射的愈伤组织增重 量与对照差异不大，且随照射剂量的加大愈伤组织增重量呈递减趋势。龙麦29、 龙辐819、农大718和龙辐麦8四个品种的幼胚辐射后接种在诱导培养基上，第 14．16天左右出现增重量峰值，随着培养时间的增长愈伤组织重量呈递减趋势， 随着剂量增加愈伤组织增重逐渐下降。超微结构观察表明软X射线照射小麦幼胚 产生的愈伤组织会产生核膜断裂、质壁分离、线粒体空泡化、液泡数增多变大等 现象，且随着照射剂量的增加其变化更明显。从形态和功能上分析辐射能够打破 细胞自身防卫封闭系统，有利于外源基因导入。 利用基因枪法将HMW-GS5+10亚基基因导入愈伤组织中，在照射剂量为O．5 和1．0 测证实该基因己整合到受体基因组中。试验结果证实，转基因植株均为经过低剂 量辐射处理得到的，且转化率明显高于对照；对照及其它辐射处理均没有获得转 化植株。经SDS．PAGE电泳分析，利用花粉管通道法导入HMW-GS5+10亚基基 因的龙辐麦8号和龙辐麦10号中，已在3株小麦中有HMW-GS5+10亚基基因的 因组中。龙辐麦10号转化率为1．95％o；龙辐麦8号转化率为6．51％o。这3株小 麦的照射剂量分别是：龙辐麦10号1株，剂量为1．0KRad；龙辐麦8号2株，剂 量为0．5KRad。由此可认为，对小麦进行低剂量的辐射处理可提高其遗传转化率。 低剂量辐射处理促进遗传转化的适宜剂量大致为：用Y射线照射孕穗期植株剂量 为O．5KRad一1．0KRad；用软z射线照射幼胚为O．5．1．0KRad。 转基因品系除目的基因性状表达外，其它农艺性状也产生变化，主要是由于 目的基因整合位点的随机性及基因问互作造成的。对转HMW-GS5+10基因的品 系进行品质分析，其沉淀值、稳定时间、延伸性和面积较受体有较大提高。对转 HMW-GS 5+10基因的转基因品系进行SDS．PAGE凝胶电泳检测，高分子麦谷蛋 白亚基组成均具有5亚基和10亚基，从蛋白质水平证实目的基因的表达。 关键词：春小麦；辐射处理；高分子量麦谷蛋白；转基因 THE oFLoWDoSES oN EFFECT TRANSFERHMW—GSGENESINToWHEAT Geneticand Major：Crop Breeding Ph．D．Candidatie：SuJun Liu