利用多种途径进海南龙血树种质创新.pdfVIP

摘 要 本试验以龙血树幼嫩茎段为材料，通过对龙血树幼嫩茎段两步培养法再生的研 究，建立了龙血树幼嫩茎段离体再生体系，证明了愈伤组织的发生和激素种类与浓度 的关系；并在此基础上研究了愈伤组织再生对不同人工诱变方法(60Co辐射、EMS、 秋水仙素)的反应、被处理愈伤组织再生能力和再生植株性状多样性、以及再生植株 不同生理角度(外观性状、细胞学)的变异性，得到了2株变异株系。并从龙血树商 业种植苗圃罩选择出11种变异类型。 (1)首次对海南龙血树进行了种质创新途径的研究，田间自然变异的选择是目 前最为有效的途径，组织培养分别培结合EMS、60Co辐射和秋水仙的诱变途径也是 有效果的。田间实生群体自然变异可高达20％，已发现有1l中种变异类型，其中 LXZ09类型的变异率高达8％。EMS诱变途径中，浓度为2．O％的获得最高的微核率 (15．6‰)，EMS浓度为2．O％处理时间为4h的组合使材料达到半致死；细胞学的 观察看到了单微核、双微核、三微核、染色体桥、滞留染色体和合胞体等染色体畸变 现象，再生苗中发现了1棵变异株。60Co辐射的诱变途径中，20Gy的剂量使不定芽 半致死，再生苗中发现了1棵变异株。秋水仙素诱导多倍体途径中秋水仙素浓度0．5 ％，处理时间5d的处理组合能获得较高的多倍率，多倍率为25％。 (2)首次获得了海南龙血树新种质13份，并较为系统地对11份自然变异的种 质进行了植物学性状观察，其中6份材料具有成为龙血树新品种的潜力。这11份资 LXS01、LXS02、LXS03、LXS04、LXS06、 源中， LXS07这几份材料具有成为龙 血树新品种的潜力。 (3)首次鉴定了海南龙血树的染色体数目，构建了海南龙血树根尖体细胞染色 体制片技术。其技术要点是于上午9时～10时采集根尖，用饱和的对二氯苯预处理6h， h，置于1 固定4～18 mol／L稀盐酸在60℃恒温水浴酸化6min，置载玻片切片后用改 n= 良石炭酸品红染色30mm，敲片后显微观察。鉴定了海南龙血树染色体数目(2 42)。 (4)初步构建了基于组织培养的海南龙血树诱变复合技术体系。再生体系技术 要点是愈伤组织的诱导培养基为MS+6一BA6．0 m叽，诱导率可达62 mg／L+NAA0．5 ％：增殖培养基为MS+6一BA5．0 mg／L+NAAO．5m∥L，经4周培养，愈伤组织增殖率 可达9．6；分化培养基为MS+6一BA5．O mg／L+NAA0．1m∥L；生根培养基是MS+NAA O．3 1 m∥L+ACg／L，生根率为100％。再生体系结合EMS复合技术体系的要点是浓 度为2．O％的EMS处理生长旺盛的愈伤组织时间为4h，后进行分化和生根培养。再 生体系结合60Co辐射复合技术体系的要点是20Gy的剂量辐射生长旺盛的愈伤组织， 后进行分化和生根培养。再生体系结合秋水仙素复合技术体系的要点是浓度为O．5％ 的秋水仙素处理生长旺盛的愈伤组织时间为5d，后进行分化和生根培养。 关键词：龙血树；诱变；组织培养；种质创新；EMS；60Co；秋水仙素；染色 体 II Abstract Inthe tenderstemsof presentexperiment，the D阳c船挖口∞珑60扔口舱口wereusedas to a culture establish tissue and e丑’ectsof explants t、Ⅳo—step regenerationsystem．The types