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可视化lamp快速检测牛乳中单增李斯特菌的研究
目录
目 录
摘要………………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………．III
1前言…………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1立题背景…………………………………………………………………………………1
1．2李斯特菌的简介…………………………………………………………………………．2
1．3单增李斯特菌的检测方法研究现状……………………………………………………．．3
1．3．1传统分离鉴定方法…………………………………………………………………．．3
1．3．2免疫学检测方法……………………………………………………………………一4
1．3．3分子生物学检测方法…………………………………………………………………4
1．3．4其他检测李斯特菌的方法……………………………………………………………7
1．4等温环介导核酸扩增……………………………………………………………………．．8
1．4．1LAMP反应原理………………………………………………………………………9
1．4．2
LAMP反应产物的检测………………………………………………………………12
1．4．3环介导等温扩增研究进展…………………………………………………………．13
1．4．4病原菌LAMP检测试剂盒研究现状及展望………………………………………．15
1．5本课题研究目的和意义…………………………………………………………………16
1．6课题来源………………………………………………………………………………．．16
2材料与方法…………………………………………………………………………………．17
7
2．1实验材料…………………………………………………………………………………1
2．1．1菌种……………………………………………………………………………………………………………17
2．1．2试剂……………………………………………………………………………………………………………17
8
2．1．3仪器设备……………………………………………………………………………………1
2．1．4培养基………………………………………………………………………………18
2．2实验方法…………………………………………………………………………………19
2．2．1新型指示剂罗丹明B衍生物………………………………………………………19
2．2．2实验菌株的培养……………………………………………………………………20
2．2．3LAMP引物的选择及处理……………………………………………………………20
2．2．4实验菌株DNA模板的提取…………………………………………………………21
2．2．5
PCR检测……………………………………………………………………………………………………．．22
2．2．6
LAMP反应体系优化………………………………………………………………．22
2．2．7
LAMP特异性实验…………………………………………………………………．．23
2．2．8
LAMP和PCR检测人工污染乳中的单增李斯特菌灵敏度比较……………………23
2．2．9
PCR和LAMP反应产物的检测……………………………………………………．．23
2．2．10
LAMP反应体系稳定性实验………………………………………………………24
东北农业大学工学硕士学位论文
2．2．11室温下LAMP体系失活限制因素探究……………………………………………24
2。2．12
LAMP反应体系颜色变化的量化实验…
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