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假单胞菌产壳聚糖酶的纯化和特性研究 摘要 采用本实验室分离得到的产壳聚糖酶的假单胞菌，发酵培养后， G 将发酵液冷冻离心，取上清液通过30％冰冷丙酮沉淀以及Sephadex --25层析柱和SephadexO--100柱层析等方法对酶进行了分离纯化， 得到两个具有壳聚糖酶活性的色谱峰，分别合并具有较高酶活性的柱 洗脱液后，经PEG20 000浓缩，得到两种纯化的壳聚糖酶，即壳聚糖 酶I和II。壳聚糖酶I的纯化倍数为6．84倍。纯化后的酶分别经十 二烷基硫酸钠～聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)，均显示一条电泳 总酶活力很低只占酶I的不足10％，所以在以后的特性研究中仅研 究酶I的特性。 对纯化后壳聚糖酶I的特性研究表明，该酶在4℃下，贮存7天 以内，表现出极高的稳定性，酶活力保持在97％以上。以胶体壳聚 糖为作用底物，它的最适pH为4．5，在pH5．0--6．5范围内有较高稳 定性，最稳定的pH为5．0。最适作用温度为55。C，热稳定性范围为 30。0—40℃，最稳定的温度为30。该酶对壳聚糖的降解具有专一 性，没有几丁质酶活性。测定I(Ⅱ1值得到，该酶对胶体壳聚糖的I(In值 为2．02mg／rrL。金属离子对该酶活性影响的研究表明，sn“，Ag+，Zn”， Mn”对酶有强烈的抑制作用，Al”，Pb”对酶也有明显的抑制作用。表 面活性剂SDS对酶活力影响较大，使酶活力减半。该壳聚糖酶是…种 糖蛋白，含糖量约为O．06％。壳聚糖酶对脱乙酰度80％胶体壳聚糖水 解30min，得到较理想的产物甲壳低聚糖，它的平均聚合度为5．0， 得率为80％，由此可知，此假单胞菌所产的壳聚糖酶为内切型酶。 关键词：壳聚糖酶，纯化，特性 Purificationand from some ofchitosanase properties Pseudomonas Abstract The chitosanasewasisolatedfiomthe of supernatant centrifuged fermentation broth ofPseudomonas．Thecrude was fractionated enzyme with acetoneof30％，After solutionwas vacuumizing，theenzyme G一25 purified column and G-- by Sephadex chromatographySephadex 100column showed chromatography respectively，Twopeaks