e染色体组特异子标记的建立与应用及偃麦草遗传多样性分析.pdfVIP

E染色体组特异分子标记的建立与应用及偃麦草遗传多样性分析 研究生尤明山 导师刘广田教授 摘要 偃麦草属植物是小麦遗传改良中的重要野生近缘种，蕴含抗寒、抗旱、耐 盐碱及长穗多花、籽粒蛋白质含量高等优良性状，同时又是小麦锈病和白粉病 的重要抗源，特别是在小麦条纹花叶病和大麦黄矮病等病毒病的抗病育种中发 挥了重要作用。通过小麦与偃麦草的远缘杂交，创造了大批小麦一偃麦草双二 倍体、异附加系、异代换系和易位系材料，选育了许多小麦新品种。／本研究在 偃麦草分子标记的建立和遗传多样性分析方面做了一些工作，取得的主要研究 结果如下： l从100个lO碱基随机引物中筛选到一个在长穗偃麦草和中间偃麦草中具 有特异扩增片断的引物0PF03，并从中间偃麦草sz中克隆了该片断 OPF0312％同源性为88％。 草材料中特异扩增出目标片断SCAR9啦，可以作为偃麦草的特异SCAR 标记。 3以小麦一二倍体长穗偃麦草17个代换系和整套附加系对RAPD和scAR 标记进行了扩增验证，发现RAPD标记并未出现在含p染色体组的材料 中，而sCAR标记则出现在E。染色体组的所有染色体上，该标记可以同 时检测E。、E6染色体组染色体。 4 存在同源序列。同时，在中间偃麦草、中间偃麦草和代换系中又有特异 杂交信号，这一结果证明了RAPD和sCAR标记的正确性。 5选用40对小麦ssR引物对18份偃麦草、2份小麦和各l份黑麦、大麦、 簇毛麦材料进行了扩增，其中25对引物在绝大部分偃麦草材料中能够检 测到等位变异。根据25对引物扩增出的177个等位位点，对供试的23 份材料进行了聚类分析，发现在遗传距离0．7水平上，所有偃麦草材料 聚在一起，与小麦和黑麦、大麦、簇毛麦分属不同类群，同时在偃麦草 材料之间，25对引物也检测到较大的遗传差异。这一结果显示小麦SSR 引物可以应用于外源物种的遗传多样性分析。 6在25对引物中，筛选到引物xgwm325，能扩增出3条在不同偃麦草中 大小一致的特异DNA片断，可以作为偃麦草种质的分子标记。对其中 一条440bp的片断进行了克隆、测序，同源性比较发现为一新序列。 7用xgwm325对小麦一二倍体长穗偃麦草代换系、附加系进行了扩增， 结果只有一条100bp左右的片断出现在偃麦草所有E。组染色体上，该片 断可以作为Ec染色体组的特异SSR标记。 8对偃麦草、二倍体长穗偃麦草1E中国春代换系、小麦一中间偃麦草部分 双二倍体中2高分子量谷蛋白亚基进行了SDS．PAGE分析，发现在偃麦 草材料中存在不同于小麦的特异HM、肌Gs类型。分析了小麦×中2Bc2F2 群体的775个体的HMw-Gs组成，只在一个个体中检测到中2中偃麦草 特异HMW．GS。 9利用偃麦草特异标记SCAR982对小麦×中2 BC2Fl群体的195个单株进行 了检测，结果在39个单株中出现了标记片断，证明了该标记在偃麦草种 质标记辅助选择的有效性。 关键词：偃麦草，分子标记，RAPD，scAR，ssR，遗传多样性，高分子量谷 蛋白亚基HMW司S) and Markers TheEstablishmentof MoIecular E．Genome．Specinc Genetic Diversi姆in孙跏啊’，“小spp．L6Ve Ph．D．Candidate：Ybu