机械应力诱导血重建的差异蛋白质组学研究.pdfVIP

上海交通大学博士后出站科研报告 机械应力诱导血管重建的差异蛋白质组学研究 摘要 背景：血管重建是高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病共同的发病基础和基本 smoothmuscle 的病理过程，表现为血管平滑肌细胞(vascular cells，VSMCs)增殖、 凋亡、迁移和细胞外基质增加。研究显示，机械应力，如低切应力在动脉粥样硬化 血管重建中起重要作用，然而其分子机制仍未阐明。探讨机械应力诱导血管重建的 分子机制，对于深入了解心血管活动和疾病发生的本质以及心血管疾病的防治都具 有重要的理论和临床意义。 分析联用的差异蛋白质组学分析；②应用血管应力培养模型，分别在正常切应力(15 dyn／cm2)和低切应力(5dyn／cm2)条件下离体培养大鼠胸主动脉；③应用血管差 异蛋白质组学方法，分析正常切应力和低切应力条件下培养血管的蛋白质谱差异； ④对MS鉴定的感兴趣蛋白质Rho．GDIalpha，进一步应用Westernblotting和 Real．timePCR技术验证2-DE显示的Rho．GDI alpha在不同切应力条件下培养动脉表 alpha 表达，并应用Transwell法、流式细胞仪技术和免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测 形成情况。 个表达水平有差异的蛋白质点，其中有18个点在6周龄WKY和SHR之间的变化 趋势与18周龄WKY和SHR之间的变化趋势一致；其余32个差异表达的蛋白质点 l 上海交通大学博士后出站科研报告 低切应力条件下体外培养大鼠胸主动脉的差异蛋白质组学分析显示，正常切应力组 和低切应力组培养血管共有78个差异表达的蛋白质点，其中Rho．GDI alpha、adiII、 2得到MADIbTOFMS鉴定；③ activitymodifyingprotein tr嗍elin和receptor Westem blottmg和Rcal—tinIcPCR结果显示，Rho—GDI alpha蛋白质和mRNA表达水 平在正常切应力组均高于低切应力组，差异有显著性(PO．05)；④RN加抑制培 Rho．GDI 养V!；MCs Rho．GDI 0．05)；⑤抑制培养VSMCs F-actin束状排列的 alpha表达，能促进vsMcs 形成和粘着斑paxillm的聚集。 变化趋势一致的18个蛋白质点可能与大鼠种系之间的遗传差异有关，其余32个差 异表达的蛋白质可能参与了高血压诱导的血管重建；②正常切应力和低切应力培养 血管共有78个差异表达的蛋白质点，其中Rho．GDIalpha在低切应力条件下培养血 Rho．GDI 管的表达水平被明显抑制；③VSMCs alplla表达被抑制后，VSMCs迁移 能力和凋亡比例均显著增加，同时促进了细胞骨架形成和粘着斑聚集。结果提示， 低切应力可能通过抑制Rho．GDI 从而诱导血管重建，推测Rho．GDI alpha有望成为l临床防治动脉粥样硬化潜在的新 靶向。 关键词：差异蛋白质组学；低切应力；高血压；血管重建；Rho·GDI alllpa：血 管平滑肌