红毛藻及坛紫菜红蛋白的分离纯化与相关性质的研究.pdfVIP

红毛藻及坛紫菜藻红蛋白的分离纯化与 相关性质的研究 中文摘要 本研究以营养价值高且蛋白质含量丰富的红毛藻为原材料，通过硫酸铵分级 盐析和阴离子交换柱层析两种方法结合，快速高效地分离纯化红毛藻藻红蛋白， 并对该蛋白的光谱学性质，亚基组成，稳定性，抗氧化性及食用安全性等进行研 究。此外，为了对藻红蛋白的性质作深入了解，本研究还从坛紫菜中分离纯化藻 红蛋白，并对这两种藻红蛋白的性质进行了比较分析。 本实验首次采用盐浓度线性梯度和 pH 值线性梯度相结合的混合梯度方式对 吸附于DEAE-Sepharose 阴离子交换柱的蛋白进行洗脱，从而分离纯化得到高纯 度藻红蛋白。最终纯化的红毛藻藻红蛋白的纯度系数(A565/A280 )为 4.5 ，得率约为 0.8 g/100 g 红毛藻；坛紫菜藻红蛋白的纯度系数为 3.6 ，得率约为0.1 g/100 g 坛 紫菜。根据其可见光光谱学特征判断两种藻红蛋白均属于 R- 藻红蛋白，荧光发 射峰位于 572 nm 左右。红毛藻藻红蛋白的α、β和γ亚基的相对分子质量分别约 为 19 kDa、21 kDa 和 27 kDa 。坛紫菜藻红蛋白的α、β和γ亚基的相对分子质量 分别约为 21 kDa 、22 kDa 和 32 kDa 。 稳定性实验结果表明：藻红蛋白在pH 值为中性及偏酸性时，具有较好的稳 定性，pH 值为强碱性时，蛋白不稳定。藻红蛋白在温度低于 50 ℃时具有良好 的稳定性。短时间可见光、紫外光照射对藻红蛋白的吸收光谱特征影响较小，而 短时间红外光照射对蛋白稳定性有一定程度的破坏，故要长时间保存该蛋白仍须 低温、避光。此外，微波对藻红蛋白有较强的破坏力。 藻红蛋白具有抗氧化活性，特别是红毛藻藻红蛋白具有很强的清除羟基自由 基和过氧化氢的能力。红毛藻藻红蛋白对羟基自由基的半数清除率(IC50) 为 1.2 μg/mL ，对过氧化氢的半数清除率为 4.8 μg/mL 。坛紫菜藻红蛋白对羟基自由 基的半数清除率为 11.5 μg/mL ，但是，坛紫菜藻红蛋白清除过氧化氢的能力未 被检测到。 红毛藻藻红蛋白的急性毒性实验表明该蛋白的毒性极低。 关键词：红毛藻，坛紫菜，藻红蛋白，纯化，性质研究 i Purification and Characterization of Phycoerythrins from Bangia fusco-purpurea and Porphyra haitanensis Abstract A convenient and fast purification procedure of phycoerythrin from the red algae Bangia fusco-purpurea was described, its spectra properties, subunit composition, stability, safety as food, and the scavenging effect of phycoerythrin on hydroxyl radical and hydrogen peroxide were investigated. For comparative study, phycoerythrin from Porphyra haitanensis was also purified and its properties were compared with that of phycoerythrin from Bangia fusco-purpurea . The purification of phycoerythrin