2008细菌胞外多糖提取优化及毒性试验的研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（３）：７４～７８ 细菌胞外多糖提取优化及毒性试验研究 １ １ ２ １ 程红兵 　任　盛 　谢　红 　赵良启 （１山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室　太原　０３０００６　２山西省食品药品监督管理局　太原　０３００１２） 摘要　优化了提取Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ．Ｎ６１３胞外多糖（ＲＥＰＳ）的工艺条件，以发酵液ｐＨ值、乙醇浓度以 及醇沉时间为因子，采用响应面法试验获得了ＲＥＰＳ的最佳提取条件，即ｐＨ５．９，乙醇浓度７４％， 醇沉时间１６．５ｈ。在该条件下，胞外多糖提取率为９．２８±０．０６ｇ／Ｌ，其纯度达 ９７％，收率达 ９３．６％。此外，还进行了ＲＥＰＳ的特性粘度、急性毒性测试和蓄积毒性实验，结果表明该多糖具有 粘度高、无毒性的特点，在食品医药领域有着广泛的应用前景。 关键词　胞外多糖　响应面法　提取　急性毒性　蓄积毒性 中图分类号　Ｑ５９１．４ 　　多糖是一类天然生物高分子化合物，它广泛存在 １　材料与方法 于植物、动物和微生物中，参与能量转运、发育分化、免 ［１～４］ １．１　材　料 疫调节等生命活动过程 。以其特有的理化与生物 学性质，多糖类化合物可作为乳化剂、增稠剂、凝固剂 　　发酵液，由本室以Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ．Ｎ６１３为生产菌 等应用于食品工业，改善食品的外观特性和食用品质。 株，经补料分批发酵而得。 活性多糖良好的免疫特性在抗肿瘤、抗衰老及糖尿病 １．２　主要仪器设备 ［５，６］ 　　日立ＣＲ２２Ｇ高速冷冻离心机，７５２Ｎ紫外可见分光 治疗等方面有诱人的应用前景 。因此，多糖成为生 物工程领域的重要研究方向之一。 光度计（上海精密科学仪器有限公司），恒温振荡器（太 仓市实验设备厂），日立Ｕ２０１０紫外分光光度计，ＳＣ 　　本实验室获得了一株柠条锦鸡儿根瘤菌Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ? ? １５超级恒温槽（宁波新芝科器研究所），雷磁 ＰＨＳ２５ ｓｐ．Ｎ６１３，该菌株产生的胞外多糖具有免疫调节功能和 ? 抗肿瘤作用，且黏度高，有一定的开发应用价值。通过 型酸度计。 发酵条件研究确定了上游发酵工艺，使发酵液中的多 １．３　固液分离与去除蛋白 ［７，８］ 　　用蒸馏水将发酵液稀释 ３倍，６０００ｒ／ｍｉｎ离心 糖产量达到１０ｇ／Ｌ以上 ，所以研究并建立该多糖提 取的下游加工工艺就显得尤为重要。 １０ｍｉｎ，弃菌体，收集离心液。以Ｓｅｖａｇ法去除蛋白质， 　　本文旨在考查 ｐＨ值、乙醇浓度和醇沉时间对 处理过程如下：由氯仿和正丁醇以４∶１的体积比配制 Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ．Ｎ６１３胞外多糖（ＲＥＰＳ）提取收率的影响， Ｓｅｖａｇ液，将其按 １∶４的体积比加入离心液中，振荡 采用响应面方法（ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ＲＳＭ）优 ３０ｍｉｎ，６０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ，弃沉淀，反复处理三次， 化技术参数，建立该多糖的提取工艺。此外，为了考查 得除蛋白离心液。 其在食品医药工业应用中的可行性，进行了ＲＥＰＳ特性 １．４　醇沉分离试验 粘度试验、急性毒性试验和蓄积毒性实验，为ＲＥＰＳ的 　　将乙醇加入离心液中沉淀多糖，考查 ｐＨ、乙醇浓 开发利用提供科学依据。