极端酸性矿山废中微生物群落组成及多样性.pdfVIP

极端酸性矿山废水中微生物群落组成及多样性 学位中请人：谭贵良 导 师：1瓷崇钰教授 专 业：环境科学 中文摘要 mine 酸忭矿山废水(aciddrainage，AMD)和酸化尾矿是极端酸性环境(pH 3)的典型代表。由于AMD微生物在环境基因组研究、矿、lp环境酸化机理及 控制等方面具有重要的理论与现实意义，因此有关AMD环境中微生物群落组成 及系统发育多样性的研究已经成为当前重要的研究热点。然而，最近分子研究表 叫，目前科学界对AMD微生物的认识仍然十分有限，而且许多有关嗜酸微生物 功能群对产酸贡献的认识是片面甚至是错误的。特别地，在众多AMD产生的重 要源头当中，尾矿的研究长期受到忽视，已有的认识主要来自基于培养方法的研 究。有鉴于此，本论文采用传统微生物培养l{孑16SrRNA基因(rDNA)克隆文 库相结合的方法系统地研究了广东乐昌铅锌尾矿AMD、尾矿以及云浮硫铁矿露 天采∥场AMD-个极端酸性环境中微生物群落的组成及多样性，曰的是了斛这 儿个典型AMD环境中微生物的多样性，并探讨对AMD产生起主要负献的微生 物功能群的组成。主要研究内容及结果概括如下： (1)乐昌尾矿AMD(pH2．O)微生物传统培养结果表明，I口培养的嗜酸微 生物为氧化亚铁硫杆菌(．4cidilhiobacillu．F ferrooxidan,，，)和嗜酸异养菌一 Acidiphiliumcryptum。然而，用】6SrRNA方法却揭示尾矿AMD拥有许多在系 统发育l二不同的微生物。文席中检测到7个细菌类群(日前在AMD中被发现的 谭资良：极端醢性矿山废水中微生物群落组成及多样性 41 个被分析的克隆子中，有104个(占整个文库的73．8％)在系统发育上归入剑 和1个。文库中大约一半的序列型(代表大部分的16SrDNA克隆子)归入到}==} 前仅有少数纯培养或根本没有纯培养而仅有环境序列的细菌类群内。此外，文库 中发现～个新的序列型(LCAll6)。 (2)考虑到尾矿AMD中具有如此特殊的微￡E物群落(类群TII占优势)组 1．9)中微生物的多样性进 成，我们进一步对AMD产生的源头一酸化尾矿(pH 行了研究，以期对这两个酸化环境中微生物的组成及结构进行比较。L1BSHUFF 统计分析结果表明，尾矿与尾矿AMD之问微生物群落组成及多样性存在明显差 s“帕bacillus montserralensLs等自养铁氧化细菌以及Acidiphiliumcryptum嗜酸异 养菌。16SrRNA克隆文库分析结果表明，该环境微生物多样性较低，在分析的 142个克隆予巾，绝大部分(135个克隆子)在系统发商E归入到古细菌 16s rRNA基因序列的相似性达98．4．99．7％；4个克隆子也归为 acidiphilum Ferroplasma属，它们在系统发育树上最靠近的序列为不可培养的占细菌克隆予 (anth4，在西班牙TintoRiver中被检测到)，序列相似性为96．9％；其余3个古细 三砖勿hilum的存在。 2．6—2．9)中微生物 (3)此外，我们还对云浮硫铁矿露天采矿场AMD(pH 群落组成、结构及多样性进行了系统地研究。采用末端限制性片段长度多态2鬯分 析方法(terminalrestriction fragmentlength 中山入学博卜学位论文 S4SPR、S4SUM、 和空f叫的七个AMD样品(大塘AMD春夏秋冬的样品分别Hj 析将它们分成-个不同的