降酚菌分离、降基因定位及大肠杆菌表达的研究.pdfVIP

摘要 本文从焦化废水处理厂的活性污泥中筛选高效降酚菌。选择降酚效果最好 的菌株进行基因定位，提取其降解质粒将其转入大肠杆菌进行表达。取得较好 的研究结果。 具体如下： ’ 1．取活性污泥进行驯化培养，分离到5株有效菌株，通过4．氨基安替比林直接 分光光度法分析比较这5株菌降酚效果，确定其中降酚效果最好的H菌为研究 对象。 2．对高效降酚菌H株进行质粒提取，结果菌具有3个质粒，且质粒片段较大最 大的超过10kb。最小的2kb左右。 3．对H菌进行降酚基因的定位分析。通过SDS和原生质体再生法分别对H菌 进行质粒消除，结果发现质粒去除的菌株降酚能力也随之消失。所以初步将H 菌的降酚基因定位在质粒上。 4．提取H菌的质粒将其转入大肠杆菌进行表达，获得了转化子。 5．对转化子进行降酚效果测试，结果发现转化予获得了较好的降酚效果12h可 达77．34％，但转化予的降解速率较小，这可能与转化子所含的质粒拷贝数有 关。并证明转化子内含有与H菌株相同特性的质粒。实验得到具有降酚能力的 大肠杆菌表达体系，为污染物降解的生物技术应用打下了良好基础，具有重要 理论与实践意义。 关键词：含酚废水；基因定位；质粒；大肠杆菌表达 ABSTRACT The bacteriaWaSisolatedfrom wastewatertreatment phenol·degrading coking Activated strainwith Was ability plant’S Sludge．The highestphenol—degradating choosedfor orientationand its to gene extracted intoE．coli degradationplasmid betterresults． express．Achieved The areasfollows： Specificfindings 1．Fiveeffectivestrainswereisolatedthe fromactivatedandidentifiedthebest sludge bacteriaHforthe the phenol-degrading study fivebacteria bycomparing phenol— effect 4-Amino一4一direct degradingthrough spectrophotometricanalysis． 2．Threewere extractedfromfromthe bacteriastrainsHThe hi曲phenol-degrading was thankb more 10 andthesmallestabout2kb． largestplasmid orientationto H