CryⅠAC基的克隆及转化结球甘蓝的研究.pdfVIP

摘要 olerecea 结球甘蓝((Brassicavar。capitate)是我国的一种重要蔬菜，栽培面积已达几十 万公顷。生产上结球甘蓝虫害发生相当严重，造成了产量和品质的损失。危害结球甘蓝的 主要害虫是鳞翅目的昆虫，其中主要包括菜粉蝶和小菜蛾等。 由于在己有的种质资源中很难找到可用的抗虫材料这使得蔬菜常规抗虫育种受到了 限制。利用基因工程技术手段培育抗虫蔬菜新品种是农业发展的一个重要方向。基因工程 技术不仅安全有效而且投资少、见效快、特异性杀灭害虫和不污染环境。植物基因工程为 抗性育种提供了一条有效的方法．人们已从细菌中分离得到苏云金芽抱杆菌毒蛋白基因 (Bt)。其蛋白产物对鳞翅目昆虫具有特异的毒杀作用而对高等动物和人无害。因此，将Bt 基因转入结球甘蓝而获得抗虫材料而成为可能。 本研究内容主要涉及Bt基因的克隆，结球甘蓝高频再生体系的建立，植物表达载体 构建，转化获得阳性植株，以及对转基因植株的分子检测． 取得的主要研究结果如下： I 克隆了一段CryI^c基因：经过限制性内切酶酶切反应，克隆了一段基因，同源 性达到100％，属于CrylAe gene类型。 2建立了结球甘蓝3号品种的离体再生体系：以子叶节为外植体， 3确定了卡那霉素(Km)在不同时期的筛选浓度：通过对不同时期的卡那霉素浓度的 筛选。得出在不定芽时期的筛选浓度是25mg／L，而在生根时期的筛选浓度要降低到20 mg／L，才能得到较多的阳性植株。 4转化获得结球甘蓝植株：通过辖构建的含有BT基因的植物表达载体转化农杆菌， 利用农杆菌介导法将其转化入结球甘蓝3号品种，共获得抗生素筛选的幼苗27棵，经PCR 检测，Southern杂交分析。有3棵植株被初步证明Bt基因己经整合到结球甘蓝基因组中。 关键词； I 甘蓝：CryAC基因：克隆；遗传转化；转基因甘蓝；检测 V IAC andthe of CloningCry gene study of transformation cabbage Abstract to isan areahasreached Capitatecabbageimportantvegetable，ctjltivated hectare．Capitate is haslustthe and inthe verminou that production． cabbage’S veryseverity yield quality to insectwhichinclude and isthemainharmful pierisrapae Lepidoptera plutellaxylostella ‘ capitatecabbage． 、 Theusual ofcultivate forresistontheinsecthasbeen regulate vegetable itisha