EMS诱变及筛草莓抗灰霉病突变体的研究.pdfVIP

摘 要 8FISITaSSa 本试验以草莓(F脚a，j8 使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethylmethyl 伤组织进行处理，用草莓灰霉菌培养滤液进行离体筛选，期望获得抗灰霉病突变体材 料，从根本上解决‘幸香’草莓生产中存在的灰霉病危害问题，为草莓抗病育种探索 一条简单可行的新途径。 为得到适宜诱变的愈伤组织材料，并保证筛选出的愈伤组织能分化出不定芽，首 先进行了‘幸香’草莓叶片离体再生的研究，包括暗处理、叶龄、滤光膜覆盖、AgNO，、 激素组合等对叶片再生的影响。结果表明：暗处理6周的材料再生能力最高，超过6 周再生率下降：叶龄在35d以内的叶片，随叶龄的增加再生能力提高；用不同颜色的 滤光膜覆盖时，红膜处理因能滤去紫外光、蓝紫光、绿光而再生频率达最大，黄膜和 绿膜次之，蓝膜对再生无影响，而紫膜对再生起显著抑制作用；添加AgN03能提高 再生能力，浓度为4．0mg／L时再生率最高，继续增加Ar浓度则使叶片再生率下降； TDZ浓度范围在2．0～6．0 mg／L内时叶片再生频率差异不大，当TDZ浓度过低(1．0 rag／L)和过高(8．0mg／L)时，再生能力显著降低；不同类型的生长素的再生效果有 很大差异，吲哚类生长素对再生均有较好效果，2，4．D效果较差，NAA各浓度处理 对再生能力影响差异较大。 O．8％5个浓度处理和O．5h、1．Oh、2．oh 3个时间处理，实验结果表明，随着浓度的升 高和处理时间的延长，外植体褐变率和死亡率呈上升趋势， EMS浓度小于0．4％， 处理时间为1h，是较为适宜的剂量。为探明引起褐变的原因，控制诱变过程中的褐 变发生，对EMS不同剂量处理后的愈伤组织进行了一些生理指标测定，包括PPO活 结果表明，EMS处理对愈伤组织细胞膜的损伤造成胞内活性氧浓度的升高及细胞清 除活性氧能力的失调是愈伤组织褐变死亡的原因，并进一步验证了EMS对草莓愈伤 组织进行诱变采用O．4％左右浓度的处理1h是适宜的剂量，在处理完成后的前12h培 养中，应采取一些抗氧化反应的措施以利于愈伤组织的恢复和生长。 采用静置培养草莓灰霉菌20d的培养滤液分别对愈伤组织进行细胞染色和草莓 果实进行田间接种，结果表明培养滤液在细胞和植株水平上对‘幸香’草莓均有毒害， 可作为突变体抗性筛选的选择剂。通过在愈伤组织继代培养中附加不同浓度毒素粗提 液，在培养过程中称量愈伤组织鲜重的方法确定在80％培养滤液的培养基培养10d 作为抗性筛选的选择压。不同类型的愈伤组织经EMS不同浓度和不同时间处理后经抗 性筛选所产生的抗灰霉病愈伤组织的频率不具备规律性。经诱变处理867块愈伤组织 芽。获得的抗性芽有待进～步进行抗性鉴定。 关键词：草莓甲基磺酸乙酯诱变离体筛选抗灰霉病突变体 Abstract from treated)callileaves ananassaDuch．) Mutagenized(EMS ofstrawlserry(Fragaria ‘Sachinoka’werescreenedforresistancetotheculturefiltrateof mildew grey pathogen cinemaPers．The ofthe wastosolvethe caused Botrytis purposestudy problembygrey diseasein resistant mildew strawberryindustrybyobtainingcultivarsand anew privide forresistant approach breed