rd29A基因物表达载体的构建及四倍体刺槐再生诱导研究.pdfVIP

F7Z‘3U8 摘要 不良环境如低温干旱盐渍，是影响农业生产和生态环境的一个非常重要的非生物胁 迫因素。我国是一个水资源紧缺的国家，干旱和半干旱耕地面积占全国总耕地面积的 38％；其次，低温冷害是我国南北方农业生产长年发生的灾害；除此之外，我国还有大 片的盐渍土壤等待进～步的丌发利用。如何利用这些大面积的土地，提高农作物抗逆性 树种，在改善环境、平原及山区发展圈养畜牧业以及植树造林等方面都能产生较好生态 效益和经济效益。如能提高抗逆性，对西部大开发建设中退耕还林，改善生态环境，发 展圈养畜牧业具有十分重要的意义和广阔的市场前景。故本文通过四倍体刺槐根、茎、 叶建立了一套完整的再生体系，为转基因工程育种提供了可靠的依据。rd29A基因对于 旱、盐碱、寒冷都有抗御功能，因此，本项研究拟进行克隆拟南芥rd29A抗逆基因，构 建植物表达载体，为植物抗逆基因转化提供可利用的基因。转rd29A基因的抗旱，抗盐、 耐低温作物新品种的育成必将对提高作物的单位面积产量和扩大种植区域产生积极的 推动作用，转rd29A基因的抗非生物逆境林木和草类新品种的育成将为我国的环境保护 和美化带来可观的社会和生态效益以及经济效益。本实验的完成对于植物品种改良具有 重要意义，主要从两个方面进行了研究： 对引物，PCR引物设计时根据后续构建植物表达载体的需要，在上游引物一端加入一 个BamH 拟南芥总RNA中扩增出rd29A基因的全长cDNA片段。将其克隆到pMDl8一TvectoF中。 为利用rd29A基因改良植物抗逆性奠定了物质基础。 (2)以四倍体刺槐的半木质化嫩枝为外植体，通过初始培养获得无菌苗后，选取无 菌苗的不同部位作外植体，如幼嫩茎段、较老茎段、接触培养基的肥厚叶片、正常叶切 片、主根、侧根、根尖切段经不同培养基及激素诱导分化培养和生根培养，形成再生植 株。结果表明，幼嫩茎段、肥厚叶片和根尖是比较好的外植体，茎段和叶片不经过暗培 易产生不定芽，而根暗培15d转入光培产生不定芽效果好。尤以幼嫩茎段诱导不定芽效 果最好，幼嫩茎段、肥厚叶片和根尖不定芽诱导率分别为89．O％、48．7％、40．9％；对于 茎段和叶片而言，在不同激素中以6．B A、ZT年N2．4--D配合使用效果摄佳，最佳培养基 为Ms培养基盐份+B5维生素4-3mg／L6BA+2mg／LZT+0．05 mg，L2．4-D；而根尖不定芽诱 mg／LNAA。在生根培养基中，I／2MS+ 导最佳培养基为Ms培养基+1．0mg／L6BA+2．0 0．5mg／LIBA生根率高达100％。本研究初步建立了一套高效的四倍体刺槐再生系统，为 下一步进行农杆菌介导的遗传转化奠定了基础。 关键词：rd29A基因；RT-PCR；植物表达载体；四倍体刺槐；不定芽诱导率；再生植株 1l Summary Thebad as low a veryimportant environment，suchtemperature，drought．salt，is influence and forcefactor productionecological nonbiological agricultural half farmland thatwaterresourcesisin and accountsfor isanation scarcity，drydry country