micro-tm番茄高效遗传转化体系建立.pdf

攒婪 摘要 Micro．Tom是镟型矮他的番茄品种。与普通番茄相比，它植栋矮小、种植密度高、生命 阕期短并且可以被裔效地转化。这些优点使得Micro．Tom在棱糖功能基嚣缱学研究方面 具有重要作用并被广泛应周。本研究以Mie妁．To难为试糟，建立了离效褥垒体系和遗传 转亿体系，获得了转基因植株，并皮耀实时PCR技术对转基西材料进行了分子鉴定。主 要研究结果如下。 《1)建立了Micro。Tom番茄离效再生体系 研究不同外植体类型及切割方式、激素配比、糖浓度等因素对不定芽或擞髯垒的影 啭，建立一套高效稳定的组织培养荐生体系。结果表明：予咛荐生不定芽频率高于下胚 轴；予叶外植体在培养基申酶切割方式以横切为佳；2．0 mg。L。zR帮0．5mg．L。IAA组合 最适合诱导高凝率I昀Micro．Tom番茄愈伤组织和褥垒植株；培养基中蔗糖浓度为20 g．L一 时最有毋|3予不定芽再生，0．2 mg。o‘IBA最适合诱导新生根。 (2)建立了Micro．Tom番茄遗传转化体系 建立了一套基予Kan筛选的遗传转化体系。将切好的子叶在范稀释至OD6∞值为O．1 静农籽蓠菌液中浸泡lOmill，接种到不会抗垒素的培养基中共培养2d；共培养屠的外 穗体转移 Kan浓度为100 mg。L。的培养基中筛选；最终转化率平均为II。25％。疑对也 对潮霉素抗性筛选体系进行了初步研究，表明10mg．L。的潮霉索最适合用予筛选抗性 —悼* 牙。 (3)建立了转基因检测体系 以筛选标记基掰卿强卿植物肉标基121CRTISO检测对象，建立了转基函植物PCR 检测体系。结果表明，所建立的pCR检测体系能有效地对抗性檀株避行转基嚣检测。根 据凇强掰醅擞粥p基因实对PcR的Ct差值(ACt)，藏用2(1十A∞可判断基霹插入与否。确 立了用于褰酎PCR检测的最佳横板浓度范圈。用煮沸法制备的模板DNAm予PCR扩增时 稀释100—10000倍为佳。经提取纯他的模板渊A浓度在0。25—25 ng。此。1为健。 关键词：Micro—Tom番茄；苒生；遗传转化；卡那霉素；潮霉素；抗性棱株；转基避捡 渊；荧光定量PCR 瓢 Abstract ABSTRACT Micro—Tomisaminiaturedwarf withcornmon smallsize tomato。Comparedtomato，its enablesitto ata ithasashortlife andcanbetransformed grow highdensity，and cycle such hasbeenused in efficiently．With features，Micro—Tomextensivelyplant advantageous functional research。Inthis establishedanefficient genomics study，we regenerationsystem，a transformationforMicro-Tom．Some were andhad genetic system transgenicplants obtained