rna干扰草莓har基因的初步研究.pdf

摘 要 摘 要 植物中的抗坏血酸，不仅在于它为不能正常合成AsA的少数动物(包括人类)提供丰富的 维生素C源，它在植物的抗氧化作用、光合作用以及生长代谢等方面也具有非常重要的生理 功能。因此，AsA含量已成为衡量农产品品质的重要指标。而抗坏血酸还原酶催化脱氢抗坏 血酸(DHA)还原为AsA，再循环利用AsA、保护细胞组分抵御氧化损伤中发挥重要作用。 草莓营养价值高，含丰富维生素C。本实验在通过构建草莓DHAR基因的RNAi植物表达载 体，对DHAR在AsA积累中的调控作用进行研究，验证DHAR为维生素C代谢过程中的重 要基因，为今后高AsA育种提供理论基础。本文研究结果如下： 1．测定了不同成熟期果实的维生素C含量和森嘎拉脱氢抗坏血酸还原酶的活性，研究 结果表明： 同品种草莓从绿熟期到全红期维生素C的含量呈现逐渐上升趋势，全红期与红熟期之间 增幅最大：森嘎拉脱氢抗坏血酸还原酶活性随时期的变化酶活性也是逐渐增大的，在生长后 期活性较高，其对AsA‘积累的作用可能主要在生长后期。DPS软件分析结果表明：DHAR 酶活性与维生素C含量呈正相关，相关系数为0．878，在0．05水平上显著。初步确定了草莓 DHAR酶活性与维生素C含量的积累存在一定的正相关关系。 2．草莓再生体系的优化 研究了不同激素配比对不定芽分化及暗培养对叶片不定芽诱导率的影响。结果表明：森 73．3‰平均出芽数可达2．2。先暗培养7天，再进行光培养，不定芽的诱导率较高。 3．农杆菌介导的遗传转化体系的优化 以草莓品种森嘎拉无菌苗叶片为材料，对革莓的遗传转化体系进行了优化。卡那霉素筛 选及除菌剂浓度对遗传转化的影响，结果表明：300mg／L(Cef)除菌外植体分化率最高，达 到47．3％，森嘎拉在不定芽分化阶段的Km筛选压力为20mg／L。 4．为了进一步研究DHAR的作用，我们做了以下研究： 采用RT-PCR方法，克隆到了草莓果实脱氢抗坏血酸酶基因DHARcDNA片段；构建了脱 达载导入草莓森嘎拉中，PCR检测都呈阳性的RNAi植株有7株。 关键词：草莓；DHAR；再生体系；遗传转化；RNAi Abstract onRNAInterferenceof PreliminaryStudy DHARGene Strawb erry Abstract Ascorbicacidnot the cannot minority humans)who onlyprovides animals(including synthesis withthe ofvitamin vitalrolein AsA source also a normally C，but plays anti-oxidation， metabolismof contentof an and a AsAhasbecome plant,etc．Asresult，the photosynthesis，growth indicatortomeasurethe of ascorbicacid important qualityagriculturalproducts．Dehydroascorbate