王镜岩生物化学教程版DNA复制和修复创新.pptVIP

4. RFC loads PCNA to the template. 5. PCNA displaces Polα-primase and functions as a DNA clamp; 6. Pol δ replaces Polα-primase and further extends the DNA strands. 酵母的自主复制区 多个ARS(autonomously replicationg sequence)发挥复制起点的功能。 酵母染色体Ⅳ的着丝粒附近为ARS1序列，ARS1分为A,B,C三个功能区, A,B起主要作用,C起次要作用。A区为15bp,其中11个保守，称ACS (ARS consensus sequence)。有复制起始子的功能。B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。B3是ABF1（ARS-binding factor 1）结合区。 ORC(origin recognizing complex)：由6个亚基组成相当于DnaA和λ的O蛋白，与A/B1结合后结合于游离的DNA。 Cdc6:相当于DnaC,及λ的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。这对于在Origin上起始复制是必须的。 Mcm: DnaB螺旋酶。即 licensing factor ABF1：（转录因子）结合于B3 酵母DNA复制的起始 起点辨认复合体 由酵母cdc6基因编码的复制激活体蛋白 小染色体维持蛋白（复制许可因子） 周期蛋白-周期蛋白依赖性蛋白激酶 由酵母cdc7,dbf4基因编码的另一种蛋白激酶 前复制复合体 后复制复合体 PCNA（增殖细胞核抗原）三聚体的结构与原核生物DNA聚合酶? 的β亚基二聚体相似。 真核生物DNA复制的模式 复制蛋白A 复制因子C (a)前导链的合成由DNA聚合酶α起始，然后RFC除去DNA聚合酶α，结合PCNA和DNA聚合酶δ（图中未示出），滞后链的合成由DNA聚合酶α起始合成引物，然后由RFC装载PCNA和DNA聚合酶δ（或ε），合成冈崎片段。 （b）当DNA聚合酶接近下游冈崎片段的RNA引物时，RNase H1降解RNA引物到最后一个核苷酸，最后一个核苷酸由FEN1/RTH1切除，连接酶连接两个冈崎片段断。 滞后链末端的引物被切除后会形成缺口 端粒酶可以加长DNA的末端 二、DNA的损伤修复 (一) 错配修复 大肠杆菌的Dam甲基化酶可以使DNA的GATC序列中A的N6甲基化，新合成的链在短期内未能甲基化，如果有错配碱基对，则需切除新合成链的错配区，MutS二聚体识别并结合到错配碱基部位，mutL二聚体与MutS结合，使DNA形成突环，复合体随ATP水解而移动，直至遇到GATC序列，随后核酸内切酶MutH结合到MutSL上，将未甲基化链GATC位点G的5?端切开，若切开处位于错配碱基的3?侧，则由核酸外切酶Ⅰ或核酸外切酶X沿3?→ 5?方向切除核酸链。若切开处位于错配碱基的5?侧，则由核酸外切酶Ⅶ或RecJ沿5?→ 3?方向切除核酸链,新的DNA链由DNA聚合酶Ⅲ和连接酶合成并连接。在切除链的过程中，解螺旋酶Ⅱ和SSB帮助链的解开。 人类的hMSH2和hMLH1基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌的MutS和MutL相对应，错配修复的过程与与大肠杆菌相似。 切开处位于错配碱基的3?侧 切开处位于错配碱基的5?侧 * 端粒酶可以加长 DNA的复制和修复 第30章 * It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material. 一、DNA的复制 （一）DNA的半保留复制 DNA半保留复制的实验证据 1958 年Meselson和 Stahl的实验 （二）DNA复制的起点和方式 θ型复制 D环复制 滚环复制 真核rDNA的扩增，F因子DNA的转移，λ裂解途经的复制，φX174，M13，G4等单链环状DNA噬菌体 第二阶段复制都是滚环复制。 线粒体DNA为D环复制 1956年 Kornberg发现的DNA聚合酶I（100kg大肠杆菌可以分离0.5g纯化的酶）由一条肽链组成，有5′→3′聚合酶活力， 5′→3′外切酶活力，和3′→ 5′外切酶活力。用蛋白酶水解得到的Klenow片段有3′→ 5′外切酶活力和5′ →3′聚合酶活力。 （三）DNA聚合反应有关的酶 DNA聚合酶催化的反应 Protease cleavage DNA po