农杆菌介导的双抗虫基因Pta-CrylAc番茄的遗传转化研究.pdfVIP

l Ac 农秆菌介导的双价抗虫纂因pta—Gry 番茄的遗传转化研究 摘要 本研究优化了番jI枉的再生体系和农杆菌介导的番茄转化体系，并构建了应用于农 进行了菊茄转纯、转化番茄的分子嫩物学鉴定以及遗传学分析，并初步进行了转基因 番茄的抗斑鉴定工作，主要结果如下： l优化了农杆菌介导番茄转化的几个影响因素；①外檀体长度在5硼左右有利于愈 痿缝绫的影或；⑦毙照培养溅麓培养受有秘予愈痿组织翡形成；③农辑蔼镘染 香酮使用浓度为50∥Ⅲ01／L：⑦共培养时间为三天时获得了最高的转化效率；⑧ 选雳羧苄毒霉素必耱菌裁，浓发淹300璎g／l；◎戬弦l传为选择裁辩戆浓度秀 4mg／l。 2 抗虫载体，并以根癌农杆菌LBAl100为侵染蘸转化番茄。并且，转化后从325个终 毽髂菝褥再生獯称24椿，再叟攀为8。5篙。 并且确定阳性植株为15株，转化率为62．5％。 4对彳，援掾送孬了摭斑基霆＆弼庇分离分辑，缝暴簿会孟德承痰律，掰镶霹蕊蛙之 比为3；l；并且抗斑基因。弼d口和抗虫基因户船共分离。 5对T。械株进行了除萆剂抗性检测，抗除草剂销效成分PPT谯20mg／l。 6对Tl代植株B卜l一8P-7进行了小菜蛾幼虫视步抗性鉴寇，抗虫性程度较为显著， 毽不阏褴辣差异较大。 关键词：鬻茄，cryIAc，Pta，根绱农杆菌，遗传转化，抗虫 VI T量le t耀nsfor撖ationOf intomaloVia gene鼍ic pta—CrylAc 4删西国删切口i棚一Ⅻnediation Abstr巍ct Ane獭ciont wasestablished讯 regenera娃onsystem越d蠢缈幻趺r洳削咐鲫妇耐舰nsgen{esystem tol瑚主o．A w嚣 in辩蕊cid撼ge勰s pian|秘p辩ssionV∞幻r辩A溜王A33褥·融黪lha两。疽ng储o cons打ucted帅d tomato嘶lsfomlationThem01ecuJar empIoyedin—即6础埘rf赫晰·m础dred assay， irIsectq蟹sis伽cetestwere totarnsfofmedtamato gelleticsan8Iysis粕d perfonnedsuccessf呲ly variety Mie∞矗b整．善he s蕊m嚣i嚣翻bellow： m毒钟辑s瓣宅s l An罄掰cjem柏d rapid以即幻c础m硎·me瘫讲耐觚nsfomationprocedure for ①The 5 calllls expl跚tinn1ITl’long induction．②somel2 w船opthnal sui掘ble蟊Nc8llusind疆c娃秘。③The optl撼潮蛀me删敷臻弧oc哪8tion煳8一lOminutes．④optlmal eon∞辑拄a硅黼。f