番茄抗芝麻斑点蛋白组学的初步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 番茄(三弦印P坶fcD玎Ps铡饴刀f姗’Mill)原产于南美洲的秘鲁、厄瓜多尔、玻利维亚一带，是 茄科番茄属的一年生草本植物。由于其果实营养丰富，口感佳，色泽鲜艳，栽培广泛，产量 高，深受全世界人民的喜爱，其市场需求量大。据世界粮农组织统计，1994年至2006年全 球番茄出口贸易总额由41亿美元增长到80亿美元，而我国番茄生产居全球第一。但随着番 茄需求的增加，番茄保护地连种，各种病害随之蔓延，造成番茄减产甚至绝产，给番茄产业 带来巨大经济损失。 近年来番茄芝麻斑点病害在多地爆发，给番茄生产带来严重威胁，该病在河南、广西、 浙江、江苏一带菜区发生较为普遍，危害较重，我省许多地区也有发生，呈加重和蔓延趋势。 目前，番茄芝麻斑点病的抗性机理尚不是很清楚，也没有抗性基因的相关报道，这在很大程 度上影响了对番茄芝麻斑点病的控制。因此，对番茄芝麻斑点病抗性机理的研究具有重要意 义。“后基因组时代”的到来，使功能基因组学(Functionalgenomics)成为研究的重点，蛋 白质组学(proteomics)则是其“中流砥柱”。目前还没有人用蛋白组学来系统的、全面的研 究番茄对该病应答的分子机理，抗病相关的蛋白调控网络没有研究，因此，运用双向电泳技 术对番茄抗、感品种的蛋白质组差异进行研究，探究其蛋白调控网络，迫在眉睫，具有深远 意义。 本试验首先进行了番茄抗病种质资源的筛选，以东北农业大学番茄研究所提供的50份 番茄品种为材料，利用人工接种技术对不同番茄品种进行苗期接种鉴定，鉴定方法组合为： 摩擦接种法，接种苗龄为4片真叶，芝麻斑点病菌孢子液浓度为1×107个孢子／mL。筛选结 果为：抗病品种2个，09605和09009：中抗品种14个；感病品种28个，为090ll等，极 感病品种6个。 在双向电泳研究中，对蛋白质双向电泳体系进行了部分优化，包括样品的破碎方法、研 磨时间和蛋白样品上样量，结果表明，研钵研磨的更充分，研磨时间10min，获得的蛋白质 样品浓度大，更适合后续的分析，上样量为1200ug时，凝胶图谱中蛋白点最多。 利用双向电泳技术，选取番茄抗、感品种09605和0901 l为试验材料，进行番茄芝麻斑 点病菌胁迫下的差异蛋白组学研究。经过重复试验，得到了较为成熟的番茄叶总蛋白双向电 泳体系，研究番茄抗、感品种在番茄芝麻斑点病菌胁迫下，蛋白质组的变化。经试验分析， 最终得到了33个差异蛋白点，其中09605(抗)接菌后，与对照相比，表达量上调蛋白点8 个，表达量下调蛋白点9个，新增蛋白点1个；0901l(感)接菌后，与对照相比，表达量 上调蛋白点5个，表达量下调蛋白点10个。对这些点进行肽指纹图谱分析，成功鉴定17个 蛋白质点，得到PMF数据，结合生物信息学方法分析各蛋白点的具体功能，从整体水平上 研究番茄对番茄芝麻斑点病的抗病机理，预期能为番茄抗病育种研究提供理论支持，为进一 步研究奠定基础。 关键词番茄：番茄芝麻斑点病；抗源筛选；双向电泳：差异蛋白 Abstract STUDYOF THEPRELIMINNARY TOTHERESISTANCEOF PROTEOMICS THETOMATOBROWNSPOT Abstract inthe ofSouthAmericaof Tbmato(砂c叩P瑚缸D玎甜c“尼疗f堋M订1)originatingVicinity Peru， Ecuadorand herbofthe intheSolallaceae Boliv试Anllualgenus T0mato．Itsfmitisnutritious， goodtaste，brightcolordelicious，extensiVeyield，loVed aroundthe