利用RAPD标进行湖南部分地方柚资源亲缘关系分析.pdf

利用m心D标记进行湖南部分地方柚资源亲缘关系分析 摘 要 柚栽培历史悠久，分布广泛，是一类重要的经济果树。但是由于其无融合生 殖现象的广泛存在，导致许多同名异物或同物异名的现象比较普遍，影响柚种质 资源的评价和利用。以往多从形态学、孢粉学和同工酶等方面研究柚资源的分类 演化，取得了一定的成果。但还存在许多分歧，在技术手段上也存在着一定的局 限性。本试验利用m圩D技术，对我省31份柚属材料进行了亲缘关系分析。主 要试验结果如下： 1．用改良sDS法、高盐低pH法和cTAB法三种方法提取柚的幼嫩叶片基 因组DNA，结果表明改良sDs法是较好的提取方法。且增加盐的浓度能避免提 取的基因组DNA呈凝胶状，有利于去除多糖： ul， 2．对柚RAPDIPcR条件进行了优化。1)反应体系：每一反应总体积为2s 其中10×bu恐r(含M92+20mM)2．5 ul，模板DNA(40ng／u1)o．51ll，随机引物(5uM) 2ul，dNTP(10mM)0．25ul，TaqDNA聚合酶(2UM)0．5m，灭菌超纯水补足 25 ul；2)扩增程序：93℃，预变性2 nlin；93℃，变性lmin；36℃，退火1min； 72℃，延伸2 min；共42个循环，最后在72℃保温lOmin； 3．从100条10bp随机引物中筛选出了13条多态性强、带型清晰的引物， 在分析柚资源时均得到成功应用； 4．供试材料在遗传距离取O．24时，所有供试材料聚为4大类群。从指纹图 谱来看，各类有其特有的特征谱带。 关键词：柚 亲缘关系 RAPD标记 in on ofsomelocalPomelo Relationship studyPhylogenetic HunanbvRAPD AbstrcIct Pomelowhichisa f-mit common veryimpor妇血tcrop，haslong11istory．A problem， whichlimitsidentificationaIld the caused homonym趾dsynonymby utilizing，is resources Lotsofworks pomelo exchangiIlg． byusing aIld chaferoncefocusedon andevolution isoen珂megro研h ide面fication，ta)(onomy of thcrc盯estillsome and diVersity pomelo．But divergencelimitation．Here，genetic 31 of01lr hadbeenconductcdRAPD．，Ik of materialsprovince byusing pomelo asf．ollows： m咖resultsar