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利用同源序列法隆柑橘抗病基因类似物及其初步分析.pdf
捌鼹嗣潦序列法克隆糖辐撬瘸棼嚣类像物覆冀褪步势拆
摘要
柑橘是我国重要的经济作物,其产量位厨世界第3位。瘸害一点是作物嫩产的主要
闻题。在现鸯瓣嚣禚栽培鑫释中撬瘸资源毒疆,努餐麸透缘矮中壳酝到穗应熬菝薅基因
是未来进行转基因抗病育种的关键问题。
提裹撞彩获癌蛙是毽甥蠢秘赘耄幕器拣之一。隧蒺瑗饯釜物技零靛不黪发震,利用
植物熬因工程进行植物抗病育种已经成为一种重要手段。到嗣前,人们已经通过图位克
隆季曩转痤子椽签等方法分离炎隆到一些檀物撬癀基慰。
本研究楚根据已宛隆的椴物抗瘸蕊因保守序列设计简并引物,用PCR及R卜PCR的
方法从椹撬撬痰材料中扩增墩抗痰基鞫类似貔(resistancegene
analog,RGA),劳对
其中部分RGA的碱基序列及其编码的氨基酸序列进行了分析。同时随机挑选了一个RGA
作为探针,进毒亍基因缌RFLP分孝厅,.}j唏取得螅主要结豢蛊霹下:
1.建立了提取总RNA的体系。缀凝胶电泳和紫外分光光度计检测,其总RNA的质
量基本达到分子生物学实验技术要求,能够用于RT—PcR分树及Northern杂交分榜。
2+根据积知抗瘸基因保守结构域设计了多对简并引物。采用PCR方法,分别从枳
主的墩泳带(特征带)。分析全部的PCR结巢发现,所有的引物对均能在感瘸材料或抗
并弓l物无法鲞接对感瘸和抗瘸材料进行抗病麓因的筛选,可熊需要进一步设计特异褴更
高的引物来进行筛选。
3.分割辩积壳基因组DNAPCR产物及Rt—PcR产物克隧成功的蕊组子遴行铡痔。
麻£酌在碱基序列和氨基酸序列上均有一定程度的同源性(5.7%一25.3%);RGAs之间也
存在缀高靛蓠源往(27.2蒜一100%)。黧侮迸一疹对这黧RGAs进行筛选还有镑磷究。
看出:RGAn一17—2在不同豹聿嚣橇{孝籽拣壳、丸里香、黄受、菡痰l譬)中郡有若予溺
源片段。
关键词:柑橘;抗病蒸因;抗病基因间源类似物;R—FLP
华孛农韭丈学鞭士学经{龟变
Abstract
is economicofour the
Citrusan resides
important crop country.Itsyield
seasesare thatiimit
inlheworld+Thedi
3rd keyproblems crop
productions.
in
resistancematerialsthe
are1imiteddisease current
There
relatiyesisthebase
fromcitrus fortransformation
resistance
the gene breeding
citrus.
for
a
is main in
To theresistance
improve ability targetplantbreeding.With
ofmode
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