利用同源序列法隆柑橘抗病基因类似物及其初步分析.pdf

捌鼹嗣潦序列法克隆糖辐撬瘸棼嚣类像物覆冀褪步势拆 摘要 柑橘是我国重要的经济作物，其产量位厨世界第3位。瘸害一点是作物嫩产的主要 闻题。在现鸯瓣嚣禚栽培鑫释中撬瘸资源毒疆，努餐麸透缘矮中壳酝到穗应熬菝薅基因 是未来进行转基因抗病育种的关键问题。 提裹撞彩获癌蛙是毽甥蠢秘赘耄幕器拣之一。隧蒺瑗饯釜物技零靛不黪发震，利用 植物熬因工程进行植物抗病育种已经成为一种重要手段。到嗣前，人们已经通过图位克 隆季曩转痤子椽签等方法分离炎隆到一些檀物撬癀基慰。 本研究楚根据已宛隆的椴物抗瘸蕊因保守序列设计简并引物，用PCR及R卜PCR的 方法从椹撬撬痰材料中扩增墩抗痰基鞫类似貔(resistancegene analog，RGA)，劳对 其中部分RGA的碱基序列及其编码的氨基酸序列进行了分析。同时随机挑选了一个RGA 作为探针，进毒亍基因缌RFLP分孝厅，．}j唏取得螅主要结豢蛊霹下： 1．建立了提取总RNA的体系。缀凝胶电泳和紫外分光光度计检测，其总RNA的质 量基本达到分子生物学实验技术要求，能够用于RT—PcR分树及Northern杂交分榜。 2+根据积知抗瘸基因保守结构域设计了多对简并引物。采用PCR方法，分别从枳 主的墩泳带(特征带)。分析全部的PCR结巢发现，所有的引物对均能在感瘸材料或抗 并弓l物无法鲞接对感瘸和抗瘸材料进行抗病麓因的筛选，可熊需要进一步设计特异褴更 高的引物来进行筛选。 3．分割辩积壳基因组DNAPCR产物及Rt—PcR产物克隧成功的蕊组子遴行铡痔。 麻￡酌在碱基序列和氨基酸序列上均有一定程度的同源性(5．7％一25．3％)；RGAs之间也 存在缀高靛蓠源往(27．2蒜一100％)。黧侮迸一疹对这黧RGAs进行筛选还有镑磷究。 看出：RGAn一17—2在不同豹聿嚣橇{孝籽拣壳、丸里香、黄受、菡痰l譬)中郡有若予溺 源片段。 关键词：柑橘；抗病蒸因；抗病基因间源类似物；R—FLP 华孛农韭丈学鞭士学经{龟变 Abstract is economicofour the Citrusan resides important crop country．Itsyield seasesare thatiimit inlheworld+Thedi 3rd keyproblems crop productions． in resistancematerialsthe are1imiteddisease current There relatiyesisthebase fromcitrus fortransformation resistance the gene breeding citrus． for a is main in To theresistance improve ability targetplantbreeding．With ofmode