纳米银的生物效及毒性作用机制.pdf

摘要 摘要 由于具有良好的光电、催化、超导性能和杀菌消毒活性，纳米银已经成为目 前市场上应用最广泛的金属纳米材料，商品化产品几乎无处不在。纳米银的大量 生产和广泛应用增加了其向环境释放的机会，同时增加人体暴露的机会。因此， 纳米银颗粒对生物及生态系统的影响日益得到关注。本课题采用水相合成法制备 粒径为25．30nlTl的纳米银颗粒，利用小型鱼medaka动物模型分别评价纳米银颗 粒的急性、亚慢性毒性和胚胎发育毒性以及组织分布特征，并探讨了纳米银颗粒 毒性作用机制。由于自由态银离子是目前公认的最强鱼类毒性金属之一，而纳米 银在环境或生物体内可以释放A矿，本实验还通过对照实验比较了两种不同形态 银的组织分布和毒性效应。 采用次磷酸盐液相还原法制备纳米银干粉，合成体系中加入聚乙烯吡咯烷 酮(PVP)作为稳定剂，通过有机溶剂洗涤、离心以及真空干燥等过程获得纯净 最大吸收波长为400hill，不仅表明球形纳米银颗粒，而且显示纳米银颗粒在制 备和分散过程中没有发生团聚和氧化。透射电镜和粒度分析表明纳米银粒径分布 均匀，绝大多数颗粒大小为25—30nln。总的来说，本实验中获得分散相良好、粒 径分布均匀、稳定的纳米银颗粒有利于生物效应及毒性作用评价。 在急性毒性实验中，纳米银颗粒在24h内的Uv．vis光谱特征无明显变化， 而且不改变溶解氧含量，成年medaka静水暴露96h的LC50值为O．87 mg／L。在 亚慢性毒性实验中，成年medaka连续静水暴露14d，较低浓度组(O．05—0．25 mg／L) 受试动物死亡率与对照组无统计学差异(胗0．05)，最高暴露组(0．5 mg／L)medaka 的亚慢性最大无致死剂量为O．1 mg／L。纳米银主要造成肝脏、鳃和肠道金属负荷 的增加，尤以肝脏中银含量增加最明显。生化分析显示纳米银诱导肝细胞损害， 造成肝、鳃等组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)活性下降以 及还原型谷胱甘肽(GSH)浓度减少，同时造成脂质过氧化产物含量明显增加， 表现氧化损伤效应。组织病理学检查也证实纳米银暴露造成肝脏和鳃组织损伤。 综合纳米银在成年medaka体内的组织分布和产生的毒理学终点，肝脏是纳米银 颗粒的毒作用靶器官。此外，相对于急性毒性实验和死亡率指标，medaka亚慢 性毒性实验的组织病理损伤对纳米银毒性比较敏感，可以作为灵敏的生物标志物 来评价金属纳米颗粒生态毒性。 摘要 众所周知，生命早期小型鱼对化学物质暴露和环境应激比较敏感，本部分实 test)检测纳米银的胚胎毒性。 验采用目前通行的部分生命周期实验(Partial．1ife 在70d暴露期间，较高浓度纳米银颗粒(400．1000pg／L)明显抑制medaka胚胎 的发育过程，比较典型的毒性包括发育延迟、色素细胞减少、视顶盖最大宽度(脑 发育指标)减少以及血液缓流等。胚胎期的观察还发现纳米银暴露造成高发生率 的形态发育异常和畸形，包括水肿、骨骼畸形、心脏异常、眼睛发育异常以及鳍 膜缺损等等。实验中得到的发育迟滞和畸形发生率的非线性剂量．反应关系反映 了纳米银颗粒毒性作用的复杂性。在实验中我们还发现大量水肿病及淤血的 medaka胚胎孵化后常常伴随形态发育异常，因此推测纳米银暴露造成胚胎期 medaka渗透压调节紊乱，而淤血意味着血循环系统输送营养素质能力的下降， 这些可能是造成胚胎期medaka发育异常的主要作用机制。本实验提示体内实验 是评价纳米银颗粒毒性作用的敏感实验方案，同时部分生命周期实验可以有效地 评价纳米银颗粒的发育毒性和生态危害。 依据胚胎发育毒性实验，我们通过光学显微镜、扫描电镜技术、组织生化分 析以及自由基测定探讨了纳米银胚胎毒性的作用机制。纳米银颗粒可以破坏 medaka卵壳表面结构和完整性，损害卵壳的机