毛细管电泳技术二陈汤指纹图谱研究和植物细胞单细胞分析中的应用.pdfVIP

提 要 目的：研究毛细管电泳技术在中医药现代化研究中的应用，论文分为两部分研究 内容：1．研究毛细管电泳技术在中药指纹图谱研究的应用，建立二陈汤毛细管电泳指 纹图谱分析方法。2．研究毛细管电泳单细胞分析技术和激光诱导荧光检测技术在植物 细胞单细胞分析中的应用，实现单个小麦胚性细胞内氨基酸的分析。 方法：1．利用毛细管电泳技术对《局方’二陈汤的水煎液进行分析。分离缓冲液； 选用35姗ol／L硼砂(加乙腈浓度至1嘶)为运行缓冲液(pH9．O)。用二极管阵列检测 器对谱图在190舳～300姗进行全扫描得三维光谱图，确定最佳检测波长为200nto。换 用紫外检测器对二陈汤供试品进行检测，CE条件为：分析运行电压：25kV，极性从芷 极到负极；毛细管卡盒温度：25。C；压力进样：0．5psi×5s。2．运用毛细管电泳激光 诱导荧光检测技术对单个小麦胚性细胞的氨基酸进行检测。利用电穿孔技术将荧光素 FITc引入到活的原生质中进行细胞内的衍生。在细胞内的衍生反应完成后，进行 X NaOH-1．20×1旷 mol／L CE-LIF检测。分离缓冲液：25lo吨mol／L硼砂／1．25×101 mol／L精胺(pH9．45)。CE条件为：分析运行电压：25kV，极性从正极到负极：毛 细管卡盒温度：259C。 结果：1．确定了二陈汤水煎液电泳分析的最佳缓冲液和最佳电泳条件，初步建立 了二陈汤的指纹图谱，在一个电泳条件下实现了全方中20多个峰的分离，方法上也具 有较好的重现性和稳定性。2．采用电穿孔方法将衍生试剂强制导入小麦细胞中，使 氨基酸的衍生反应在细胞内进行，这能够有效得减小细胞内样品的稀释。结合LIF检 测的高灵敏度实现了植物细胞内组分的分析。单个小麦胚性细胞中lO种氨基酸得到了 较为理想的分离． 结论：毛细管电泳法具有分离模式多、分离效率高、速度快、使用范围广、所需 样品量和试剂量少、可直接分析水溶液等特点，在中药指纹图谱分析和植物细胞单细 胞分析中显示了其优越性。可以预见，毛细管电泳技术在中医药现代化研究中将有非 常广阔的前景。 关键词毛细管电泳；二陈汤；指纹图谱；氨基酸；激光诱导荧光检测；单细胞 分析 The in of of theResearch ApplicationCapillaryElectrophoresis andthe Cell Er-tangFinger-PrintSingle-CellAnalysisofVegetal SpeciaiW：BiomedicalRlgin咖 Chao Author：．Wang Xin Tator：Peng of inthe thethe researchof Objective：To study applicationcapillaryelectmphoresis Chinese the of TCM(Traditional application Medicine)modernization．1．Tostudy in theresearch ofChinesetraditional capillaryeleetrophor