棉花杂交种与亲间dna胞嘧啶甲基化及其基因差异表达分析.pdfVIP

中文摘要 利用杂种优势可以提高作物产量，节约土地资源，并创造了巨大的经济和社会 效益，是遗传学应用于实践最成功的范例之一。对杂种优势机理的研究已将近一个 世纪，然而在许多方面仍然是一个谜。棉花是世界上最重要的纺织作物，在世界经 济、政治、以及社会事务中起了很重要的作用。杂交棉在中国和印度已经得到广泛 的商业化利用，并研究了许多年。然而到目前为止，关于棉花杂种优势的分子方面 的研究报道却很少。本研究以不同优势棉花杂交组合为材料，系统研究了它们在营 养生长、产量及品质性状以及根系性状上的杂种优势，然后进一步分析了不同发育 阶段棉花杂交种和亲本间的DNA甲基化差异以及基因表达差异，最后将基因差异 表达模式与产量性状的表现及杂种优势进行了相关分析，分别从表观遗传调控和功 能基因转录水平对杂种优势的分子机理进行了探讨。其实验结果和主要结论如下： 1．以同一母本与两个不同的父本杂交获得两个杂交组合，经田间比较试验，结 果表明，组合石远345xCRl41是一个优势比较高的杂交组合，其优势不仅表现在营 养生长和一些产量相关性状上，而且还表现在根系性状上；而组合石远345xSGK321 是一个在地上部的优势相对比较低的组合，但是在某些根系性状上却存在比较高的 杂种优势。 2．为探讨DNA甲基化与杂种优势的关系，采用甲基化敏感的扩增多态性技术 段这两个杂交组合中杂交种和双亲中的胞嘧啶甲基化水平。结果表明棉花基因组中 至少有20％的CCGG位点发生胞嘧啶甲基化。 3．依据特定位点的胞嘧啶甲基化从亲本向杂交种的遗传及其变异，我们比较了 杂交种与亲本之间的胞嘧啶甲基化模式。研究结果表明杂交种与其双亲相比，发生 了广泛的胞嘧啶甲基化变化，这种变化包括超甲基化和去甲基化同时还包括甲基化 类型的潜在转变(如从外部胞嘧啶甲基化到内部胞嘧啶甲基化的转变或从内部胞嘧 啶甲基化到外部胞嘧啶甲基化的转变)；对于表现出杂交种相对于亲本的甲基化水 A)中的去甲基化位点数高 平降低的类型，在高优势组合石远345／CRl41(Hybrid B)中的去甲基化位点数。尽管有一类表 于在低优势组合石远345／SGK321(Hybrid 现为在杂交种中的甲基化水平升高，但是这些超甲基化位点仅仅占两个杂交组合中 总多态性位点数的很少一部分。 4．通过对三个亲本系和两个杂交种在苗期阶段和花期阶段的5-CCGG位点的 胞嘧啶甲基化进行总体分析，我们发现花期阶段比苗期阶段有更多的位点发生去甲 基化。说明棉花中的胞嘧啶甲基化具有组织特异性。 5．存在于低拷贝基因组区域的胞嘧啶甲基化变化可以被Southern杂交证实。 对杂交种相对于亲本表现甲基化变化的位点进行测序表明同功能己知的基因同源， 包括转录调控、信号识别、富含亮氨酸重复、钙离子通道、类PDR的ABC转移、 同工酶、脱羧酶、磷酸酶以及ATP酶等。 为材料，用mRNA差异显示方法分析了两个杂交组合的杂交种与其亲本在苗期阶段、 蕾期阶段、花期阶段和铃期阶段的基因表达差异，结果表明两个棉花杂交种与其亲 本间在四个阶段均存在显著的基因表达差异，我们既观察到量上的表达差异也观察 到质上的表达差异，而主要的基因表达差异发生在质的水平，包括：(i)双亲共沉默 条带仅在F。中出现，在双亲中均不出现(UF-nP)：(iv)单亲表达一致型，即该条带在 双亲之一和杂种中出现，而在另一亲本中不出现mPFll。 7．进一步分析了质的差异表达模式在不同阶段的变化，结果表明差异模式的数 量在不同阶段是变化的，而花期阶段的差异模式的数量要相对高于其它阶段，暗示 了花期阶段的基因差异表达在杂交种的产量形成和优势表现上起了关键的作用。同 时在花期阶段，UFlnP和UPFl模式(分别代表杂种特异表达或超显性表达和显性 表达)在高优势杂交种中的数量要比低优势杂交种高得多，这表明在花期阶段更高 水平的这两种模式可能与杂种优势具有正向的相关关系。 8．最后以一套双列杂交组合(24个F1，10个亲本)在盛花期的叶片为材料， 用差异显示法进一步分析了四种质的差异模式的数量。以差异模式的数量为变量， 与棉花5个产量性状(子棉产量、皮棉产量、铃数、铃重和衣分)的杂种表现、杂 种优势进行相关分析的结果表明：单亲基因表达一致模式(UPFl)与杂种产量性状 中单位面积铃数呈显著正相关，但与杂种优势的相关