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大豆隐花色素基的酵母双杂交分析
大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析
摘 要
隐花色素(cryptochrome)是吸收蓝光和近紫外光而调节植物形态、新陈代谢
变化以及向光反应的一类光敏受体。隐花色素广泛存在于生物界中，研究证明
许多植物的隐花色素是分子量为70—80kD的蛋白质，有两个可识别区域：一个
related)，但不具有光解酶的
是与光解酶有同源序列的N端PHR(photolyase
DNA修复活性；另一个是光解酶不具有的C端延伸区，C端是蛋白一蛋白结合区，
具有保守性，也是蓝光信号得以向下游传递的延伸区域。蓝光信号转导涉及隐
花色素与其他蛋白质问直接或间接的相互作用。目前，许多植物的隐花色素基
因已相继被分离和初步鉴定。中国农业科学院作物科学研究所613室克隆了大
豆两个隐花色素基因并对其功能作了初步的分析。
酵母双杂交是体内研究蛋白质相互作用的新方法。为进一步研究这两个基
因的功能及下游信号传导机制，本试验对这两个基因作了酵母双杂交分析。首
先用PCR及酶切、连接的方法构建了两个基因的N端、C端及全长的酵母双杂
pGADT7组合转入酵母菌株AHl09进行自激活检测，结果表明只有
pGBKT7．CRY2N+PpGADT7能激活报告基因的表达，因此重组质粒
pGBKT7．CRY2N不能用于酵母双杂交分析。
酸锂转化法将诱饵和文库质粒先后转入酵母菌株AHl09后，经_SD／．Leu．Trp培养
获得了17个能同时激活三个报告基因的阳性克隆。对阳性克隆进行了PCR和测序
分析，序列分析的结果表明其中5个克隆含有正确的读码框，同源性分析表明其
中4个是与光系统中基因同源的序列。
最后将来源于大肠杆菌这五个克隆的质粒与诱饵质粒pGBKT7．CRYlC组合
重新转回酵母细胞AHl09中作了进一步的验证，结果表明五个基因与大豆隐花色
素基因CRYl的C端有相互作用的可能性，但结果有待于进一步验证。
关键词：隐花色素酵母双杂交大豆
Abstract
to
are whichcanabsorbenear-UV／blue
Cryptochromesphotoreceptors light
the and
regulatemorphology，metabolicphototropism
in shownthat ofthe were
exist study many cryptochromes
widely organisms．The
70—80kD．Thereweretwoidentifiable
whichhadamolecularof
proteins weight
in istheN—terminalwhichissimilarin and
regionscryptochromes：one sequence
DNA otheroneisC—terminal
structureto butlack
photolyases repairactivity，the
whichisdifferentfrom C—terminalisaconservativefor
photolyases．The region
SOthatthe
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