二、构建基因表达载体二、构建基因表达载体运载体.pptVIP

基因工程的概念 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 一、获取目的基因 二、构建基因表达载体 二、构建基因表达载体 二、构建基因表达载体 二、构建基因表达载体 二、构建基因表达载体 二、构建基因表达载体 * * 基因工程育种 谢永佳 原理、操作对象、操作水平、优点？ 如何用基因工程技术培育蓝玫瑰？ 背景资料：天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的B基因，而开蓝色花的矮牵牛中存在B基因，但不知道其碱基序列。 生物材料 DNA mRNA cDNA(互补DNA) PCR 一定大小范围DNA 基因组文库 cDNA文库 获取目的基因 人工合成 基因文库 包 括 一、获取目的基因 ①从生物材料中分离 ②人工合成 花瓣细胞的mRNA图谱 根细胞的mRNA图谱 1 2 3 4 5 6 7 8 B基因的mRNA可能存在哪一个普带内？ 3或5 一、获取目的基因 方法：从开蓝色花的矮牵牛中提取B基因的 mRNA，再逆转录得到B基因。 目的：是使目的基因在受体细胞中稳定存 在，并且可以遗传给下一代。 二、构建基因表达载体 运载体 （1）常用的运载体： 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 （2）作为运载体必备的条件： ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制； ②有一至多个限制酶的切点； ③有标记基因。 限制酶 （1）作用特点： 特异性 （2）切割产生的末端： 黏性末端或平末端 （3）切割的化学键： 磷酸二酯键 连接的部位：磷酸二酯键（梯子的扶手）， 不是氢键（梯子的踏板）。 DNA连接酶 假设C表示蓝色素基因，D表示运载体。如果只考虑两两结合，可能有多少种重组DNA？分别是？ 3种，分别是CD、CC、DD。 用什么方法分离出我们需要的表达载体？ 离心法 1 2 3 启动子 终止子 目的基因 标记基因 二、构建基因表达载体 复制原点 它们有什么作用？ 启动子： 位于基因的首端，能驱动基因转录出mRNA 终止子： 位于基因的末端，能终止基因的转录 标记基因： 有助于将含有目的基因的细胞筛选出来 复制原点： 能驱动DNA复制的开始 二、构建基因表达载体 下列关于基因工程的叙述，错误的是 A.目的基因和受体细胞均可来自动物、植物或微 生物 B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的 工具酶 C.基因表达载体上没有起始密码子和终止密码子 D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细 胞和促进目的基因的表达 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 细胞类型 受精卵 体细胞 受体细胞 基因枪法 Ca2+处理细胞 花粉管通道法 显微注射技术 农杆菌转化法 常用方法 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定