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目 录
摘要………………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………III
1前言……………………………………………………………………………………………1
1．1研究的目的与意义………………………………………………………………………．1
1．2文献综述…………………………………………………………………………………1
1．2．1高温对蔬菜作物的影响……………………………………………………………一2
1．2．2热胁迫相关基因的研究……………………………………………………………一7
1．2．3
DNA甲基化…………………………………………………………………………．8
1．2．4
MSAP技术…………………………………………………………………………………………………．10
1．3主要研究内容…………………………………………………………………………一14
1．4本试验技术路线………………………………………………………………………一15
2材料与方法…………………………………………………………………………………．16
2．1试验材料………………………………………………………………………………．16
2．1．1植物材料……………………………………………………………………………l6
2．1．2主要分子生物学及生化试剂………………………………………………………16
2．1．3主要试验仪器………………………………………………………………………16
2．1．4主要软件……………………………………………………………………………16
2．2植物材料的处理以及取样………………………………………………………………16
2．3试验方法………………………………………………………………………………．17
2．3．1
MSAP法检测基因组甲基化………………………………………………………一17
2．3．2甲基化特异性片段的克隆测序与序列分析…………………………………………23
3结果与分析…………………………………………………………………………………27
3．1MSAP检测基因组甲基化………………………………………………………………27
3．1．1黄瓜基因组DNA的提取…………………………………………………………一27
3．1．2酶切产物电泳检测…………………………………………………………………27
3．1．3预扩增和选择性扩增产物的琼脂糖电泳检测………………………………………28
3．1．4黄瓜基因组甲基化类型……………………………………………………………29
3．1．5不同处理的黄瓜基因组DNA甲基化多态性分析…………………………………30
3．1．6各引物组合甲基化模式多态性分析………………………………………………一32
3．1．7不同处理基因组DNA甲基化比率分析……………………………………………36
3．2特异性甲基化片段的克隆测序与序列分析……………………………………………．38
3．2．1甲基化差异条带回收………………………………………………………………．38
3．2．2阳性克隆的鉴定以及序列的测序…………………………………………………一40
3．2．3序列分析……………………………………………………………………………41
4讨论………………………………………………………………………………………………………………………．．47
万方数据
东北农业大学农学硕士学位论文
4．1MSAP技术检测黄瓜基因组DNA甲基化……………………………………………一48
4．2不同处理的黄瓜基因组甲基化水平变化………………………………………………49
4．3黄瓜基因组DNA甲基化差异片段克隆序列相关功能分析……………………………49
4．4本试验的创新点………………………………………………………………………一52
5结论…………………
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