细胞内功能区隔与蛋白质分选创新.ppt

第六章细胞内功能区隔与蛋白质分选 定义：结构、功能和发生上相关的内膜形成的细胞结构称为细胞内膜系统。 功能：区隔化；增加内表面积，提高代谢和调节能力。 系统发生上内膜起源于质膜的内陷和内共生。 个体发生上新细胞的内膜系统来源于原有内膜系统的分裂，具有epigenetic的特性。 第一节 蛋白质分选的基本原理 一、蛋白质分选信号 ①信号序列（signal sequence）：引导蛋白质定向转移的线性序列，通常15-60个氨基酸残基，对所引导的蛋白质没有特异性要求。 ②信号斑（signal patch）：存在于完成折叠的蛋白质中，构成信号斑的信号序列之间可以不相邻，折叠在一起构成蛋白质分选的信号。 signal sequence and signal patch 二、蛋白质分选运输机制 1、门控运输（gated transport）：如通过核孔复合体的运输。 2、跨膜运输（transmembrane transport）：蛋白质通过跨膜通道进入目的细胞器。 3、膜泡运输（vesicular transport）：蛋白质在内质网或高尔基体中被包装成衣被小泡，选择性地运输到靶细胞器。 第二节 胞内膜泡运输 细胞内膜系统之间的物质传递常常通过膜泡运输方式进行。 大多数运输小泡是在膜的特定区域以出芽的方式产生。其表面具有一个笼子状的由蛋白质构成的衣被（coat）。这种衣被在运输小泡与靶细胞器的膜融合之前解体。 衣被小泡在细胞内沿微管运输。 与膜泡运输有关的马达蛋白有3类，在这些马达蛋白的牵引下，可将膜泡运到特定的区域。 动力蛋白（dynein），趋向微管负端； 驱动蛋白（kinesin），趋向微管正端； 肌球蛋白（myosin），趋向微丝的正极。 一、衣被类型 已知三类： 笼形蛋白（clathrin） COPI COPII 主要作用： 选择性的将特定蛋白聚集在一起，形成运输小泡； 如同模具一样决定运输小泡的外部特征。 三种衣被小泡的功能 （一）笼形蛋白衣被小泡 相关运输途径：质膜→内体；高尔基体→内体；高尔基体→溶酶体、植物液泡。 结构：3个重链和3个轻链，形成具有3个曲臂的形状。许多笼形蛋白的曲臂部分交织在一起，形成具有5边形网孔的笼子。 衔接蛋白(adaptin)：目前至少发现4种，结合不同的受体。 当笼形蛋白衣被小泡形成时，可溶性蛋白dynamin聚集成一圈围绕在芽的颈部，将小泡柄部的膜尽可能地拉近（小于1.5nm），从而导致膜融合，掐断（pinch off）衣被小泡。 （二）COP I衣被小泡 功能：负责回收、转运内质网逃逸蛋白（escaped proteins）返回内质网，由7种蛋白组成。 回收信号：Lys-Asp-Glu-Leu（KDEL）。 COP I也介导高尔基体不同区域间的蛋白质运输。 （三）COPⅡ衣被小泡 介导从内质网到高尔基体的物质运输。形成的部位称为内质网出口，该处无核糖体。 主要亚基：Sar1GTP、Sec23/Sec24、Sec13/Sec31。 多数跨膜蛋白直接与COP II结合，少数跨膜蛋白和多数可溶性蛋白通过受体与COP II结合。 分选信号位于跨膜蛋白胞质面，形式多样，有些包含双酸性基序[DE]X[DE] ，如Asp-X-Glu。 二、衣被形成 衣被召集GTP酶为G蛋白。包括ARF和SAR 1，调节因子有： 鸟苷酸交换因子（ GEF）； GTP酶激活蛋白（GAP）。 ARF参与高尔基体上clathrin与COP I衣被的形成。 SAR 1参与内质网上COP II衣被的形成。 衣被召集GTP酶存在于细胞质。ER上形成COPII小泡时，SAR1释放GDP，结合GTP而激活。 激活的SAR 1暴露出一条脂肪酸的尾巴，插入ER膜，促进衣被蛋白的核化和组装。 活化的SAR1可激活磷脂酶D，将一些磷脂水解，使衣被蛋白牢固地结合在膜上。 当小泡从膜上释放后，衣被很快就解体。 Coat assembly 三、膜泡运输的定向机制 （一）SNAREs 介导运输小泡与靶膜的融合。 分为v-SNAREs和t-SNAREs。 具有一个螺旋结构域，相互缠绕形成跨SNAREs复合体，将小泡与靶膜拉在一起。 神经细胞中，SNAREs负责突触小泡的停泊和融合。破伤风毒素和肉毒素能选择性地降解SNAREs，阻断神经传导。 病毒融合蛋白的工作原理与SNAREs相似，介导病毒与宿主质膜的融合。 HIV fusion protein SNAREs的分离：由NSF催化，以ATP为能量，，插入几个适配蛋白将SNAREs复合体分开，以便开始下一轮的转运。 （二）Rabs Rabs也叫targeting GTPase，属于G蛋白，起分子开关作用。已知30余种，不同膜上具有不同的Rabs。 Rabs促进和调节运输小泡的停泊和融合。 Ra