奶牛FCGRT基因启动子多态性及激素对FcRn表达影响的研究.pdfVIP

影响的研究 研究生：张春林 导师：王加启研究员 赵国琦教授 (扬州大学动物科学与技术学院) 中文摘要 本试验由四部分组成，主要研究了中国荷斯坦奶牛FcRn受体伐链基因(托GRr) 启动子基因多态性以及体外激素处理对FcRn 方法发现的SNP位点为研究对象，从构建不同单倍型荧光素酶报告基因载体和分析 乳腺内FeRnmRNA表达丰度两个方面研究了启动子多态性对转录活性的影响。并 且，通过体外激素处理培养的奶牛乳腺上皮细胞，为进一步研究乳腺内FcRn受体 变化以及影响因素提供了依据。 在PCR-SCP多态性，位于引物P1扩增产物有AA、AB、BB3种基因型，其频率分 别为25．40％、59．26％、15．34％；引物P2扩增产物有CC、CD、DD3种基因型，其 频率分别为20．63％、56．61％、22．75％；引物P3扩增产物有EE、EF、FF3种基因型， 坦奶牛在该基因位点上的SNP2和驰咿3均处于Hardy-Weinberg平衡状态。 试验二：构建奶牛FCGR瑾因启动子3种不同单倍型荧光素酶报告载体并在 293细胞中检测其转录活性。根据奶牛FCGR瑾因启动子区2个单个核苷酸多态性 (SNPs)位点C．11 C～CA和TA厂rA 3种基因型的奶牛基因组DNA为模板，用PCR法扩增出包含启动子 两个SNP位点的长1789bpI驹DNA片断，利用l印nI／B酉11双酶切，纯化回收后分别与 CA．PGL3．Basic、TA．PGL3．Basic 3个表达载体，并测序验证其DNA序列。用电穿 孔方法将报告基因载体转染至293细胞，采用双荧光素酶报告基因系统评估不同单 启动子不同单倍型载体表达存在差异，SNP影响了FCGR赡动子的转录活性。奶 功能研究和转录调控奠定了基础。 试验三：采集健康中国荷斯坦奶牛乳腺组织，通过测序检测砌孺动子单 核苷酸多态性，分析各单倍型对表达水平影响，研究中国荷斯坦奶牛FCGRT启动 子SNP对FeRnmRNA表达水平的影响。结果表明，不同单倍型中国荷斯坦奶牛乳 腺内FcRn 的影响，可能会进一步的影响乳腺中FcRn的表达以及对IgG的转运。 试验四：以中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞为研究工具，采用了RT-PCR方法检 测激素处理对FeRnmRNA表达的影响。本文测定了体外培养乳腺上皮细胞时，添 加不同浓度甲状腺素T4(0、O．01、0．1、l I．tmol／L)对FeRnmRNA的表达的影响。 1．tmol／L)、胰高血糖素(0、O．01、O．1、1 试验结果表明：随着激素添加剂量的增加，甲状腺素和胰高血糖素能够显著的促 的表达，为进一步研究乳腺内FcRn受体变化以及影响因素提供了依据。 上皮细胞；mRNA ontheFCGRT and Study promotergene theeffectofhormonetreatmentonthemRNA ofFcRn level Chunlin M．S．Candidate：Zhang Advisor：Prof．WangJia-qiProf．ZhaoGuo-qi ofAnimalScienceand University) (College Technology，Yangzhou ABSTRACT Tllisresearchwas of