顺铂联合雷帕霉素、3-MA对胰腺癌A549细胞及裸鼠原位移植瘤的影响.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………8 英文缩写……………………………………………………………………17 研究论文顺铂联合雷帕霉素、3-MA对肺腺癌A549细胞及其裸鼠原位 移植瘤的影响 前言……………………………………………………………………．18丹lJ舌……………………………………………………………………．18 材料与方法……………………………………………………………．19 结果……………………………………………………………………32 附图……………………………………………………………………38 附表……………………………………………………………………47 讨{仑……………………………………………………………………53 结论……………………………………………………………………55 参考文献………………………………………………………………55 3K／AKT／m 综述PI TOR通路与肿瘤的研究进展………………58 致谢………………………………………………………………………67 个人简历…………………………………………………………………68 万方数据 中文摘要 顺铂联合雷帕霉素、3一№对肺腺癌A549细胞及其裸鼠原位移植 瘤的影响 摘 要 目的： 作用及其相关机制； 2探讨顺铂分别联合雷帕霉素、3-MA对裸鼠肺腺癌A549细胞癌原位 移植瘤的生长抑制作用和相关机制。 方法： 一对肺腺癌A549细胞的处理 1将处于对数生长期的A549细胞用0．25％胰酶消化、收获、计数，调 震荡5min，用Bio—Rad酶标仪在测试波 加入二甲基亚砜(DMSO)150I_tL， 长为570nm，滤过波长为655nm处读取吸光度(A)值。细胞增殖抑制率= (对照组平均A值一加药组平均A值)／对照组平均A值×100％抑制率(％) 5软件计算出各药物的50％细胞抑制浓度 3MA。然后用graphpadprism (50％inhibitory 分别以每孔1．0×106／ml密度接种于六孔培养板中，待细胞长至孔底面积 约70％．80％后分别加入稀释好的药物。本实验分为四组：对照组(无任 顺铂+雷帕霉素组(加10nmol／L的RAPA 顺铂+3．MA组(加3}tmol／L的3-MA 万方数据 中文摘要 别均培养24h、48h、72h后进行检测。 迁移的情况。 4Realtime 后mTOR、LC3．II及Bax mRNA的表达情况。 5Western LC3．II及Bax的蛋白表达水平。 二对肺腺癌A549细胞癌原位移植瘤的处理 1将处于对数生长期的A549细胞用0．25％胰酶消化，调整成终浓度 接种24只， 好的裸鼠肺腺癌A549细胞原位移植瘤模型随机分为4组，每组6只，即 每只裸鼠注射计量为0．2ml／天，对照组和顺铂组每天注射一次，联合用药 组为隔天注射一次。用药期间记录裸鼠饮食和精神状态变化，测量裸鼠体 重和肿瘤大小，用药结束后处死全部裸鼠，完整剥除瘤体，测量肿瘤大小、 计算肿瘤抑制率、HE染色观察肿瘤细胞形态学变化。 2Realtime RT．PCR法检测A549细胞裸鼠原位移植瘤模型经药物作 mRNA的表达情况。 用后mTOR、LC3．II及Bax 3Westernblot方法及免疫组织化学方法检测A549细胞裸鼠原位移植 瘤模型经药物作用后瘤体中mTOR、LC3．II及Bax的蛋白