新麦草多倍体诱导及其细胞学的分析.pdf

摘 要 新麦草(Psathyrostachys 体物种，因其低倍性，适宜用染色体加倍方法进行遗传改良。研究旨在利用离体组 织培养并诱导同源四倍体对新麦草进行染色体加倍。 首先以2品种新麦草为材料，建立新麦草高效再生体系。分别以幼穗、幼胚和 适于愈伤诱导，但2品种有一定差异。幼胚需4℃预处理l～5d，成熟胚需lO℃下浸 泡48h。2，4-D在愈伤组织诱导阶段作用最显著。大于4cm幼穗和成熟胚需添加0．3～ 0．5mg／LABA抑制花器官分化和胚萌发。CH可促进愈伤组织生长，但对外植体细胞 分化方向没有决定作用。胚性愈伤容易分化和再生，而非胚性愈伤在添加低浓度 2，4一D和6-BA的培养基上经2次以上继代改造可部分转化为胚性愈伤。愈伤组织分 化再生过程中NAA和6-BA均起重要作用，胚性愈伤分化率均达80％以上。建立新麦 草高效再生体系的关键步骤是外植体筛选、诱导愈伤组织形成和胚性愈伤组织的改 造。 用秋水仙素处理新麦草萌动种子、分蘖芽和愈伤组织诱导染色体加倍，处理后 的植株用根尖压片法进行染色体倍性鉴定。结果表明，在30℃下，用1500mg／L秋水 为24．4％：以500 率更高，四倍体细胞平均比例为42．65％，此外还发现突变为单倍体、三倍体、非整 诱导愈伤组织加倍效率最高，平均四倍体细胞比例为53．58％，并得到8株四倍体细 和气孔保卫细胞观察表明，新麦草加倍植株叶片长、宽均较二倍体有所增加。四倍 体叶片气孑L保卫细胞长度比二倍体增加13．52％，差异显著。气孔之间距离显著增大。 比较诱导形成的同源四倍体新麦草光合作用和叶绿素荧光动力学。测定结果用 直线回归和Farquhax模型进行拟合。结果表明，四倍体光补偿点、光饱和点、最大 净光合速率高于二倍体，气孔导度值整体低于二倍体，表明四倍体对强光的适应性 好于二倍体。四倍体C02补偿点、CO：饱和点、最大羧化速率、最大电子传递速率和 最大磷酸丙糖利用速率也显著高于二倍体，表明四倍体在高光强和高CQ浓度下比二 倍体具有更大的光合潜力。叶绿素荧光观测结果表明，四倍体原初光能转化效率高 于二倍体，干旱胁迫下四倍体PSII实际光化学效率、光化学淬灭系数qP和非光化学 淬灭系数qN低于二倍体，说明干旱胁迫下二倍体的光保护机制作用更明显。 统计2个二倍体品种新麦草根尖细胞染色体，其中具14条染色体的细胞占统计 细胞总数的86．25％。染色体顺次C一分带与45SrDNA分子原位杂交(FISH)，结果 表明，新麦草7对染色体可根据各自独特的带型而彼此区分开来。新麦草染色体组 组，同时也发现存在带型多态性。FISH结果显示45SrDNA在二倍体新麦草染色体上 有6个主要分布位点，均位于染色体短臂端部，某些染色体中部和长臂末端也存在 弱的杂交信号，可能属于次缢痕以外的rDNA分布位点。新麦草加倍细胞28条染色 体上共存在12个主45SrDNA位点。顺次C一分带与原位杂交结果将3对45SrDNA位 点初步定位于新麦草的I、ⅡI以及V染色体短臂末端，推测这3对染色体可能是NOR 染色。体。 关键词：新麦草；组培再生体系；染色体加倍；C一分带；荧光原位杂交；光合作用 RussianWild Inductionand of Polyploidy Analyses Cytological Ryegrass Abstract Russianwild arare in diploidspecies Triticeaewhichisfittobe chromosome were developed、析th doubling．polyploidy inducedviainvitroculture