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调控pH值提高木聚糖酶活力的研究 洪枫余世袁陈牧 南京林业大学4t：x-学院南京210037 摘要通过控制产酶过程pH值能有效提高里氏木毒木聚糖酶活力。结果表明，当控制 调控时间不宜过长，一般应以控制1-2d后让其自由发展为宜。 关键词pH调控木聚糖酶半纤维素酶里氏木霉 中圈分类号Qj556 pH对微生物生命活动的影响很大。pH的改变会引起细胞膜正负电荷的改变，从而引起 ’ 细胞膜透性的变化，影响微生物对营养物质的吸收、酶的形成及活力、代谢途径的改变等。各 J。通常认 类微生物有其不荷的最低、适宜及最高pH范围，霉菌的pH适宜范围一般在4～6Ll 毫 长减慢；当pH3．5时，生长速度显著下降。然而。这些oH对产酶的影响并非如此。 据研究，pH是影响木聚糖酶合成的决定性匠素之一[3】，由于常规法制备木聚糖酶时，对 产酶过程中的pH不加控制，因此产酶周期短，菌丝体死亡快，酶活力也不高。鉴于此。在研究 里氏木酶RutC一30制备木聚糖酶的产酶历程基础上，探讨了控制产酶过程中pH在低范围 (4．0左右)时对木聚糖酶合成的影响，为今后的生产性研究提供理论依据。 1材料与方法 1．1菌种 在马铃薯、木糖、琼脂斜面上接种的里氏木酶(TrichodermareeSei)RutC一30，置30℃恒 温箱中培养7d后，于4C条件下保存备用。 1．2木聚糖的制备 提液中和至pH为中性后，离心分离，用蒸馏水洗滤渣至乳白色，风干研磨成细小颗粒封存备 用。测纯度(其中含木聚糖的百分率)。 1．3培养基 电 聚糖，起始pH用柠檬酸缓冲液调至4．8。 1．4未聚糖酶的制备 口H值、木糖浓度、木聚糖残留率及蛋白质浓度等。 1．5酶水解 ·158- …_盆 以80r／rain的转速振荡4h。酶解结束，使酶失活．经离心，取清液储于小瓶中供高效液相色谱 分析。然后进一步计算各糖得率，计算方法如下： 木二糖得率(％)=HPLC测得的木二糖克数(g)÷酶解底物中木聚糖克数(g)x100 木三糖、木四糖及木五糖的浓度均按木二糖的标准方程计算，得率按上式计算。 低聚糖／术糖=低聚糖得率÷木糖得率 低聚糖臆糖(％)=低聚糖得率÷总糖得率×100 注：其中0．9为单糖转换成聚糖的系数，低聚糖得率为木二糖至木五糖得率之和，总糖得 率为木糖至木五糖之和。 1．6测定方法 总还原糖的测定采用DNS(3，5～二硝基水杨酸)法【53；酶液可溶性蛋白质的测定采用美 国Bio—Pad公司的标准L3j。木糖等糖类的测定采用高效液相色谱法，色谱条件为：采用 WatersHPLC246一E型色谱仪，Aminex Sigma公司。 2结果与讨论 培养基的初始pH值用lmol／L的柠檬酸缓冲溶液调至4．8，产酶过程中用柠檬酶对pH 值进行调控。具体做法为：(A)培养1d后用柠檬酸调pH至4．0左右，以后任其自由发展(以 下简称A方法)；(13)为了防止pH值环境变化过大造成菌丝体不适应，对pH值调控方法做了 法)，另一组仍加酸进行pH调控，维持3d后顺其自然(以下简称B一2方法)。本实验的目的 是比较产酶过程中三种不同pH调控方法对产酶的影响，其产酶历程见图1。 由图l可以看出，对产酶pH值进行调控，菌丝体分泌的蛋白质均比常规法【3】(初始pH值 用柠檬酸缓冲溶液调至4．8后，任其自由发展)要高。当以A方法调控时，蛋白质浓度在第5d 4．0左右，培养前期分泌的蛋白质浓度比不调控pH的常规法低，A法0．5d时蛋白质浓度为 m O8