蛋白质化学--一级结构测定.pptVIP

氨基酸组成分析的步骤 目前蛋白质或多肽的氨基酸组成分析主要包括3个步骤，即： 最终获得蛋白质或多肽中各氨基酸所占摩尔百分数或摩尔比。 4、氨肽酶法 根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序 。 但由于氨肽酶的特异性 和对各种氨基酸水解速 度不同，结果往往不易 判断，在实际应用中容易 导致错误结论而少用。 （1）过甲酸氧化法 优点：能将巯基（-SH）和二硫键（-S-S-同时氧化成磺基，生成的磺酸基很稳定，肽链不再重新形成二硫键，便于肽链分离。 缺点：氧化过程中，同时将蛋氨酸的侧链氧化成亚砜，色氨酸的侧链也遭破坏。 （2）还原法 一般还需要加入8 mol/L尿素或6 mol/L盐酸胍使蛋白质变性。在这种情况下，还原剂才能有效地作用于暴露的二硫键。 溴化氰（CNBr）与肽链中甲硫 （蛋）氨酸侧链的硫醚基发生反应， 生成环化的溴化亚氨内酯，此产物水 解后，产生高丝氨酸内酯，使蛋氨酸 羧基端的肽键断裂。 这一方法的优点是产率高（可达85%）、专一性强，故实际应用较多。 （二）C末端降解法 虽然建立在Edman化学法上的自动化N端 测序技术日趋成熟，但仍有不少问题需借 助C端序列分析来解决。 C端测序尤其适合于大规模生