分子生物学基本研究法(下)..pptVIP

6.2.3植物基因敲除技术 T-DNA插入失活技术是目前在植物中使用最为广泛的基因敲除手段。利用根癌农杆菌T-DNA介导转化，将带有报告基因的DNA序列整合到基因组DNA上，如果这段DNA插入到目的基因内部或附近，就会影响该基因的表达，从而使该基因“失活”。 T-DNA：根癌农杆菌Ti或Ri质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组中，是植物分子生物学中广泛应用的遗传转化载体。 a.引物设计。LP和 RP分别代表插入基 因两端的引物，LB 是指载体上的一段 引物，目的基因片 段(设为900bp)。旁 邻序列是经测序后 获得的DNA序列。 b，PCR产物电泳结 果。分别代表野生 型、杂合子和纯合 子PCR条带。 意义： 因为T-DNA无专一整合为点，在植物基因组中发生随机整合，所以，只要突变株的数目足够大，从理论上就可能获得任何一个功能基因都发生突变的基因敲除植物库。 因为拟南芥基因组冗余序列少，基因密度高，几乎每一个DNA插入都会导致某个基因功能的丧失，结合已完成的拟南芥基因组信息，人们很容易筛选到新的功能基因。 6. 3. 5 RNAi（RNA interference, RNA干涉）技术及其应用 RNAi技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。RNAi的命名来源于安德鲁·法尔1998年在《自