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1.阪崎肠杆菌检验 GB4789.40-2010 结果判定 菌落计数 应选择10CFU-150CFU的平板，根据菌落形态计算霉菌和酵母菌。 霉菌数应采用两个平板的平均数。 霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录多不可计。 报告 检验程序 检样 25g（ml）样品+志贺氏菌增菌肉汤225ml XLD MAC或志贺氏菌显色培养基 挑取可疑菌落， 接种TSI，半固体，营养琼脂斜面 血清学分型 生化鉴定 志贺氏菌属分群及分型结果 41.5℃±1℃，16-20h厌氧培养 36℃±1℃，20-48h 操作步骤 1.增菌： 以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤中，摇匀，于41.5℃±1℃，厌氧培养16-20h。 2.分离： 取增菌后的志贺氏菌增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板上，于36℃±1℃培养20-24h。观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表。 选择性琼脂平板 志贺氏菌的菌落特征 MAC琼脂 无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 XLD琼脂 粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 表 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 操作步骤 3.初步生化试验： 自选择性琼脂平板上挑取2个以上典型菌落，接种于营养琼脂，置36℃±1℃培养20-24h，观察结果。 4.生化试验： 5.结果报告：综合以上生化试验，报告25g（ml）样品中检出或未检出志贺氏菌。 5.单核增生李斯特氏菌检验 GB4789.30—2010 5.1设备和材料 5.2培养基和试剂 5.3检验程序 5.4操作步骤 5.5结果报告 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.冰箱：2-5℃ 2.培养箱：30±1℃、36±1℃ 3.电子天平 4.锥形瓶：300ml、500ml 5.无菌吸管：1ml（具0.01ml）、10ml（具0.1ml） 6.无菌平皿：直径90mm 7.无菌试管 培养基和试剂 1.含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（YSA-YE） 2.李氏增菌肉汤LB（LB1、LB2） 3.1%盐酸吖啶黄溶液 4.1%萘啶酮酸钠盐 5.PALCAM琼脂 培养基制备 1.增菌液： 准确称取药品于蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃,15min，每225ml基础无菌加入P-19C1吖啶黄素和P-18C1萘啶酮酸各一支制成LB1；每200ml基础无菌加入P-19C2吖啶黄素和P-18C2萘啶酮酸各一支制成LB2。 2.PALCAM： 每100ml基础中无菌加入P-104PALCAM选择性添加剂1支，混匀后铺平板备用。 检验程序 检样 25g（ml）样品+LB1增菌液225ml，均质 0.1ml+10mlLB2增菌液 李斯特氏菌显色培养基 PALCAM琼脂 36℃±1℃，18-24h 接种木糖、鼠李糖，36℃±1℃，18-24h； 同时于TSA-YE平板划线纯化，30℃±1℃，24-48h 木糖-，鼠李糖+ 鉴定 结果报告 操作步骤 1.增菌： 以无菌操作准确称取样品25g(ml)加入到含有225mlLB1增菌液中，摇匀。置于30℃±1℃培养箱中，培养24h。移取0.1ml，接种于10mlLB2增菌液中，于30℃±1℃培养箱中，培养18-24h。 2.分离： 取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于36℃±1℃培养箱中，培养24-48h 典型菌落形态 观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在PALCAM琼脂平板上为小的原型灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷； 典型菌落在李斯特氏菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。 操作步骤 3.初筛： 自选择性琼脂平板上分别挑去5个以上典型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李糖发酵管，于36℃±1℃培养24h；同时在TSA-YE平板上划线纯化，于30℃±1℃培养24-48h。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。 4.生化鉴定： 5.结果报告： 报告25g(ml)样品中检出或未检出单核细胞增生李斯特氏菌。 6.溶血性链球菌检验GB/T4789.11-2003 培养基和试剂： 1.葡萄糖肉浸液肉汤 2.氯化钠 3.血平板 4.杆菌肽