生物化学第五章酶..ppt

生物酶工程示意图 酶的蛋白质结构功能 新酶分子蓝图 选择性修饰方案 突变酶 新酶 克隆酶 产品 效用 发展 酶基因 遗传设计 遗传修饰 DNA重组技术 DNA重组技术 问答题 1、简述影响酶促反应的因素有哪些？ 2、试比较酶的竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用的异同。 3、什么是米氏方程，米氏常数Km的意义是什么？试求酶反应速度达到最大反应速度的99％时，所需的底物浓度（用Km表示） 4、简述酶催化作用的特点 5、试述使酶具有高效催化效率的因素 6、酶的活性调节方式有哪些（别构调控、酶原激活、共价修饰、同工酶） 名词解释 活性中心 全酶 酶原 比活力　 诱导契合学说　　 ribozyme 固定化酶 有无抑制剂存在时酶促反应的动力学方程 通常I以较牢固的共价键与E蛋白中的基团结合，引起E失活，透析、超滤不能除去I。又称酶的修饰抑制。 按照不可抑制的选择性不同，可分为： 非专一性不可抑制剂 专一性不可抑制剂 （2）不可逆抑制： 非专一性不可逆抑制剂（p374） 抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶失活。 有机磷、烷化剂(敌敌畏、敌百虫)：作用于Ser、Thr的-OH； 氰化物：作用于Fe2+ ，抑制细胞呼吸； 重金属盐（汞、砷）：作用于含-SH的酶； 青霉素：丝氨酸羟基共价结合 专一性不可抑制剂可以分为Ks和Kcat型两类 Ks型 这类抑制剂是根据底物的化学结构设计，具有底物类似的结构，可以和相应的酶结合，同时还带有一个活泼的化学基团，能与酶分子中的必需基团反应，进行化学修饰，从而抑制酶的活性。又称为亲和标记试剂 Kcat型 这类抑制剂不但具有天然底物的类似结构，而且本身也是酶的底物，能与酶结合发生类似底物的变化，但抑制剂还有一个潜伏基团，当酶对它进行催化反应时，潜伏基团被暴露或活化，并作用于酶的活性部位，使酶不可逆失活。又称为自杀性底物。 专一性不可逆抑制剂：这类抑制剂选择性很强，它只能专一性地与酶活性中心的某些基团不可逆结合，引起酶的活性丧失。 可逆抑制与不可逆抑制的区别（P370） 第六节 重要的酶类及酶活性的调节控制(p413) 一、别构酶(allosteric enzyme) 二、酶原(enzymogen或proenzyme)的激活 三、共价调节酶(covalent regulatory enzyme) 四、同工酶(isoenzyme) 五 、核酶（ribozyme）p339 六、抗体酶(abzyme) p343 一、酶的别构（变构）效应和别构酶 ?概念：酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后导致酶分子发生构象改变，进而改变酶的活性状态，称为酶的别构调节(allosteric regulation)，具有这种调节作用的酶称别构酶(allosteric enzyme)。别构酶促反应底物浓度和反应速度的关系不符合米氏方程，呈S型曲线。 凡能使酶分子发生别构作用的物质称为效应物(effector)，通常为小分子代谢物或辅因子。如因别构导致酶活性增加的物质称为正效应物(positive effector)或别构激活剂(多为S)，反之称负效应物(negative effector)或别构抑制剂（多为代谢终产物）。 别构调节普遍存在于生物界，许多代谢途径的关键酶利用别构调节来控制代谢途径之间的平衡，研究别构调控有重要的生物学意义。 ?实例：天冬氨酸转氨甲酰酶（ ATCase ） 酶的别构（变构）效应示意图 效应剂 别构中心 活性中心 别构酶的反馈调控机理 A （产物或中间产物） E D C B 关键酶 — 别构酶的结构 别构酶一般为寡聚酶（两个以上亚基组成），易发生构象改变。 1）活性部位： （催化亚基） 负责E对S的结合与催化； 2）别构部位： （调节亚基） 可结合调节物，负责调节酶反应速度 。 这两部位可在不同亚基或同一亚基不同部位上。 E.coli的ATCase的亚基排列 催化(C)亚基（catalytic subunit） 调节(R)亚基（ regulative subunit） T态 R态 ATCase ATP + ATCase所催化的反应 氨甲酰磷酸 天冬氨酸 CTP - UTP UMP 氨甲酰天冬氨酸 二、酶 原 的 激 活 酶原的激活 是生物体的一种调控机制。这种调控作用的特点是，蛋白质由无活性状态转变成活性状态是不可逆的。 实例：胃蛋白酶原的激活