冷冻保存原理张兆旺..pptVIP

动物繁殖原理与技术 冷冻保存生物材料理论与实践 张兆旺 甘肃农业大学动物科学技术学院 1.卵母细胞和胚胎在冷冻/解冻过程中死亡的原因 （1）物理损伤（胞内冰晶） 温度下降到细胞悬浮液冰点时，首先使细胞外溶液中的水结冰，细胞内此时由于原生质的作用处于过冷却状态（低于冰点而未结冰的状态），随着温度的进一步下降和胞外冰晶的增长出现了一种胞外溶液渗透压逐渐高于胞内过冷溶液的不平衡状态。 要达到平衡，要么是胞内水分外流；要么是胞内水分就地结冰。出现哪种情况取决于温度下降的速度。 快速降温的结局 如果温度下降很快，超过了细胞膜具有的渗透能力（这种能力与细胞种类大小和温度等因素有关），胞内水分就来不及外渗，而是就地结冰，冰晶体积达到一定程度就会对细胞膜和细胞器造成机械损伤（挤压、穿刺），最终导致细胞死亡，这就是冷冻情况下的物理损伤。 胞内冰晶的预防 为使细胞内部不产生冰晶，冷冻保存液中必须添加抗冻保护剂物质。胚胎或卵子的冷冻保存中，常采用的抗冻保护剂除丙三醇外，还有乙二醇、丙二醇、DMSO和乙酰胺等。这些物质的分子量不超过100道尔顿，可以自由地通过细胞膜，所以被称作渗透性抗冻保护剂或细胞内液抗冻保护剂。细胞内、外液的抗冻保护剂的摩尔浓度较高的情况下，使溶液的冰点下降，具有抑制冰晶生成的作用。 （2）化学损伤（渗透效应或溶液效应