8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg的效果评价.pdf

250 ofClinical 临床检验杂志2007年第25卷第4期ChineseJournal Laboratory 文章编号：1001-764X(2007)04-0250-04中图分类号：R446．6 文献标识码：A ·论著· 田拥军“6，覃莉8，刘慎沛“，雷延昌8，赵西平8，陆蒙吉。，杨东亮“6(华中科技大学同济医学院附属同济医院a．临床 免疫研究室，b．实验医学研究中心，C．同济医学院病原生物学系，武汉430030) 用8种ELISA试剂检测真核细 摘要：目的评价国内8种HBsAg诊断试剂检测体外表达的18种变异HBsAg的效果。方法 sag，应改进试剂性能，提高对变异HBsAg的检出率。 关键词：乙型肝炎表面抗原；变异；ELISA HBV基因变异是乙肝防治所面临的新问题…。 随着乙肝疫苗在全球普及推广，可逃避乙肝疫苗免 fluorescence 绿色荧光蛋白(green 疫效应的S基因变异日益引起重视。HBsAg是诊断粒(pEGFP—N2)为本室保存。 1．2 利用脂质 HBV感染的重要标志物。在HBV感染者血清中 HBsAg的表达及转染效率的检测 nm的小球形颗粒的形式存在， 体介导插入HBVS基因的重组质粒转染Hela细 HBsAg主要是以22 胞。为检测转染效率，将表达绿色荧光蛋白的质粒 该球形颗粒由100个HBsAg单体组成…。每个 HBsAg单体有226个氨基酸残基，99～160位氨基 h后细胞达到 hydrophilicregion，板中接种对数生长期的Hela细胞，16 酸构成HBsAg主要亲水区(major MHR)。由124～147位的氨基酸构成的有特定空60％～80％融合，每种质粒DNA取1。0btg和pEG— FP—N2 间构型的“a”决定簇，是HBsAg刺激B细胞产生中 ml USA)稀释至总体积50Ixl；在1．5Ep管中3．0汕l 和抗体并与之结合的表位，所有血清型的HBsAg都 有共同的“a”决定簇心刮。“a”决定簇个别氨基酸的 改变可以导致“a”决定簇的空间构型改变，由此影 基稀释至总体积50斗l。将上述质粒DNA和脂质体 混合，分别加入到各孔，72h后收集细胞培养上清， 响HBsAg的抗原性，使其与抗野生型HBsAg单抗的 反应性降低或完全消失心。41而造成漏检¨、3J。不同 在倒置荧光显微镜下观察GFP的表达情况，了解转 染效率。 HBsAg诊断试剂生产厂家使用的包被单抗不同，检 1．3制备细胞裂解液转染72h后的细胞用4℃ 测HBsAg变异的能力也不同一J。为了解国产HB— ml 预冷PBS洗3次，加入1PBS，用细胞刮将细胞刮 sAg诊断试剂检测变异HBsAg的能力，本研究选用 000