CpG-ODN对鼠巨噬细胞TLR-9及Th1Th2类细胞因子分泌的影响.pdf

·28· UniversitatisMedicinalisAnhui2008 安徽医科大学学报Acta Feb；43(1) CpG—ODN对鼠巨噬细胞TLR一9及 Thl／Th2类细胞因子分泌的影响 黄维琳L2，王炯1，刘荣玉1 摘要 目的探讨非甲基化的胞嘧啶-磷酸一鸟嘌呤二核苷 的消退，同时也可通过释放多种细胞因子和蛋白酶， Toll样 酸序列(CpG—ODN)对鼠单核．巨噬细胞系RAW264．7 参与哮喘免疫炎症反应及气道的修复和重构，为支 受体9(TLR-9)的表达及Thl／Th2类细胞因子分泌的影响。 气管哮喘的重要效应细胞之一…。因此，研究巨噬 方法体外培养小鼠单核一巨噬细胞系RAW264．7细胞，逆 细胞在支气管哮喘发病机制中的作用，调控巨噬细 转录聚合酶链反应法(RT—PCR)及Westernblot检测Cp— 胞功能可能为支气管哮喘治疗提供一个新思路。 ODN，鸟嘌呤胞嘧啶二核苷酸序列(Non-CpG—ODN)，CpG． 非甲基化的胞嘧啶一磷酸一鸟嘌呤二核苷酸序列 ODN+氯喹刺激24h后巨噬细胞TI．R-9的表达，放免法及 E1．ISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子一Ot (TNF-d)、白细胞介素一6(IL-6)及白细胞介索一12(IL-12)的作用，能激活哺乳动物巨噬细胞、树突状细胞等多种 表达水平。结果刺激24 h后，CpG—ODN与CpG-ODN+氯 免疫细胞。其激活效应细胞途径是通过Toll样受体 喹组巨噬细胞TLR-9mRNA及蛋白的表达明显增加(P 0．01，P0．05)；细胞上清液中TNF—o【水平CpG-ODN组明 显高于其他组，差异有显著性(P0．05)；各组IL-6、IL．12水 活下游的信号转导通路，进而诱导各种炎性细胞因 平无显著性差异(P0．05)。结论CpG．ODN刺激可引起 鼠巨噬细胞TLR-9表达增高，调节Thl／TId类细胞因子的分 泌。 TLR-9自身表达的影响目前还不清楚。本研究以小 主题词寡脱氧核糖核苷酸类／药理学；巨噬细胞／药物作 用；巨噬细肜细胞学；Thl细胞；Th2细胞；细胞因子类；氯喹 自由词TLR-9 分泌的影响，探讨其可能发生机制。 中图分类号R392．11；R342．4；R329．2；R394．2；R977；R 341；R977．6；R978．61 1材料与方法 文献标识码A文章编号1000．1492(2008)0l一0028—04 1．1主要材料小鼠单核一巨噬细胞系RAW264．7 支气管哮喘是由多种炎性细胞参与的呼吸道慢 性炎症性疾病。肺泡巨噬细胞可通过吞噬凋亡的嗜 酸性粒细胞、中性粒细胞等而有利于哮喘气道炎症 2008一01—21接收 抗兔二抗购自美国Sigma公司；DAB显色试剂盒购 基金项目：国家自然科学基金资助项目(编号 自北京中杉生物工程公司；TNF—Ot、IL一6放免试剂盒 作者单位：1安徽医科大学第一附属医院干部呼吸内科，合肥 购自中国人民解放军总医院科技开发中心放免所； 230032 IL一12