肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法.ppt

三、肿瘤转移的常用体内模型 (一)B16-BL6小鼠黑色素瘤自发转移模型 [造模原理] B16细胞是1954年在C57BL/6小鼠耳根部皮肤上发现的自发性黑色素瘤细胞，移植后主要发生肺转移。 B16-BL6细胞来源于B16细胞，具有高度转移能力。将瘤细胞移植于局部，瘤体增殖生长后，侵袭周围正常组织和血管，进入血循环，到达远处部位发生转移，称为自发性转移。此模型可反映瘤”细胞侵袭－血行播散－侵袭”的完整转移过程，用于观察药物对肿瘤侵袭和转移能力的影响。 [操作方法] 1.瘤液制备 取对数生长期的B16-BL6细胞，吸弃培养液，用PBS洗净，用EDTA消化，加一定量培养液离心收集细胞，重悬于PBS中，将细胞浓度调整为1×107个/ml。 2.肿瘤接种 在每只C57BL/6小鼠后肢爪垫皮下注射50μl瘤液（含5×105个细胞）。 3.分组与给药 肿瘤接种次日将动物随机分组，设给药组、阳性对照药组（环磷酰胺100mg/kg）及实验对照组，每组10只小鼠，连续给药3周。 4.切除原发灶 给药3周后（瘤体≥10mm），称体重，乙醚麻醉下结扎股动脉后，截除荷瘤小鼠的后肢。 5.观察肺转移瘤灶 停药1d后，继续连续给药3周。于末次给药24h后，处死小鼠，解剖取肺，用Bouin液固定，在10倍解剖显微镜下计数肺组