质粒DNA的制备限制性内切酶切割重组（ppt 37页）.pptVIP

质粒DNA的制备限制性内切酶切割重组质粒 朱文博 中山医学院 基因克隆 定义： 经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。 基因工程 定义： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为基因工程，又称重组DNA技术。 2 提取大肠杆菌质粒DNA的方法和原则 2.3 核酸分离纯化的总原则： (1) 保证核酸一级结构完整 (2) 排除其他分子的污染（蛋白质、脂类、 糖、 有机溶剂、金属离子、其他DNA、RNA等） 溶液II：由SDS（十二烷基硫酸钠）与 NaOH 组成(裂解、变性) ① SDS的作用是解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之 变性（裂解细胞和蛋白质变性作用） ② NaOH（PH12）的作用是破坏氢键，使DNA分子变性（DNA变性作用） * 溶液III：HAC(乙酸)和 KAC(乙酸钾)组成的高盐溶液 (复性，分离) ①HAC溶液能中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA 变性而发生缠绕，并使质粒DNA复性。 ②KAC会与SDS形成溶解度很低的盐，并与蛋白质形成 沉淀而除去；溶液中的DNA也会与蛋白质-SDS 复合物缠绕成大分子而与小分子质粒DNA分离。 3.3 实验步骤 加1.4ml培养物于EP管，12000rpm×1min，去上