Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究.pdfVIP

维普资讯 ANDFERMENTAT10NINDUSTR Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究 李一松，韩希妍，赵 凤 ，曲妍妍，周艳秋，李 彬，姜毓君 (东北农业大学食 品学院，乳 品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 ，150030； 国家乳业工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨 ，150086) 摘 要 建立 了Taqman探针实时PCR方法，针对乳 中携带sea基 因的金黄色葡萄球菌进行检测 。研 究所设计 的引物具有 良好 的特异性，而且 Taqman探针实时PCR方法检测 sea基 因的灵敏度高 ，最低检 出限为 69fg，并 且该方法可在 8h内完成人工污染乳中金黄色葡萄球菌的检测，最低检出限为 83cfu／mL。研究所建立的方法 具有特异性强、灵敏性高及操作简便等优点，适宜于牛乳 中金黄色葡萄球菌污染的调查及监测。 关键词 Taqman，实时 PCR，牛乳，金黄色葡萄球菌 乳制品是人们膳食结构的重要组成部分，由于营 1．1．1 菌 株 养成分丰富，所以易受致病菌污染并使其大量繁殖 ， 标准菌株购于中国医学微生物菌种保藏管理 中 最为危险的是致病菌产生的毒素等有毒物质 ，因此在 心、大肠杆菌 O 、O。为实验室保藏菌株 (见表 1)。 食品卫生微生物检验中，应特别重视。金黄色葡萄球 表 1 实验用标准菌株 菌 (S纽 ZococcMs~uIeus)是引起食物 中毒 的一种 菌 名 编 号 金黄色葡萄球菌 ATCC 13565 主要致病菌 ，所产生的肠毒素是引起食物中毒 的主要 ATCC 25923 原因，它是一类结构相关 、毒力相似 、抗原性不同的胞 CM CC 26074 CM CC 26075 外蛋白质 ]，除了 SEA--SEE等 已鉴定的血清型外 ， 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 近几年还报道了SEG～SER、SET、SEU等新分型的 亚利桑那沙门氏菌 CM CC 47020 都柏林沙门氏菌 CM CC 50042 肠毒素 ]，其 中A型毒力最强 ，是该菌肠毒素引起 汤 b逊沙门氏菌 CM CC 5O12O 食物 中毒 的主要原因，即摄人 l g就会引起 中毒。 单增李斯特菌 CM CC 54004 CM CC 54006 同时 ，该肠毒素能够经过原料乳的热加工处理后仍具 大肠杆菌 CM CC 25922 大肠杆菌 o1 有致病能力 ，因此检测 SEA对消费者的健康有重要 大肠杆菌 o78 的意义 。