金鱼Dishevelled3基因的克隆及分化表达的分析.pdf

分类号 Q至鱼 密级 学校代码 10542 学号2Q12Q2141202 达研究 Differential on and Expression StudyCloning 3inGoldfish of Dishevelled Gene 指导教师姓名、职称 赳塞燮．割熬撞 一 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月 万方数据 摘要 脊椎动物(包括哺乳动物)基因组中该基因具有Dvll、Dvl2、Dvl3三种亚型， 长度不等进化非常保守的结构域。在果蝇体内，散乱蛋白(DVL／DSH)与细胞 有关。随着研究人员对Wnt信号转导途径愈加成熟的探究显示：生物体内的散 乱蛋白(DVL／DSH)对于Wnt信号转导途径是不可或缺的组成部分。在Wnt 信号转导途径中，DVL是～种连接受体和某些下游信号因子的支架蛋白。 在本论文中，我们主要以金鱼中的Dvl3基因为研究对象。我们先采用 ofeDNA RACE(rapid-amplificationends)克隆技术获得金鱼Dvl3基因的eDNA Blot)技术分 全长，再分别利用半定量RT-PCR技术和蛋白免疫印记(Western 析研究Dvl3基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达差异。结果显示：(1)Dvl3 个包括626个氨基酸的蛋白质。将金鱼与其它物种的DVL3氨基酸序列进行对 比，结果显示；人与其同源相似度是61。3％，非洲爪蟾与其相似度是61。8％， 小鼠与其相似度是64．5％，斑马鱼与其相似度是83．8％。可以看出相似度比值 都较高，表明在进化过程中金鱼Dvl3基因中拥有较高保守性。(2)经过半定量 卵巢中表达量最高，大脑次之，在心脏、鳃、肾三种组织中的表达水平相对较 高，鳍、肌肉、精巢在mRNA水平上的表达相对较低，肝脏中表达最低。在 金鱼的十二个胚胎发育时期，在心跳期表达最强，在出膜期中的表达次之，多 细胞、囊胚、原肠胚、神经胚、视原基、脑泡、肌肉效应、体色素及两缅胞时 期表达较高，眼色素时期表达最低。据此可推测Dvl3基因在金鱼不同的组织 和胚胎发育时期中可能起多种重要的作用。(3)提取金鱼七个胚胎发育时期和 Blot技术分析得出： 七种不同组织蛋白，在蛋自水平上，通过半定量Western 在金鱼的7个胚胎发育时期，Dvl3基因在囊胚期表达最强，在视原基时期的表 达次之，神经胚、肌效、眼色素、体色素表达相对较高，心跳期表达最低。在 万方数据 金鱼的7种组织中，在卵巢中表达最强，在肝脏中表达次之，大脑、精巢中表 达相对较低，鳍、鳃、心脏中没有表达。由此可见散乱蛋白Dvl3在金鱼不同 的组织和胚胎发育时期中可能行使不同的功能，但其具体的功能及机制还有待 进一步研究。以上结果为我们研究低等脊椎动物中Dvl3基因在Wnt信号转导 途径中的具体调控机制奠定了重要的基础。 关键词：Dishevelled，Wnt信号转导途径，Dvl3，基因克隆，WesternBlot II 万方数据 ABSTRACT