静态注射化学发光法测定氧化酶活性分析及其应用.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要………………………………．j…………………………………．5 研究论文 静态注射化学发光法测定氧化酶活性的研究及应用． 引言……………………………………………………………………9 第一部分 静态注射化学发光法测定葡萄糖氧化酶活性的研究及应用 前言……………………………………………………………………11刚舌……………………………………………………………………ll 材料与方法……………………………………………………………12 结果与讨论……………………………………………………………14 附图……………………………………………………………………20 结论……………………………………………………………………26 参考文献………………………………………………………………27 第二部分 静态注射化学发光法测定脂酰辅酶A氧化酶活性的研究及应 用 前言……………………………………………………………………28丹¨舌……………………………………………………………………28 材料与方法……………………………………………………………29 结果与讨论……………………………………………………………31 附图……………………………………………………………………37 附表……………………………………………………………………4l 结论……………………………………………………………………42 参考文献………………………………………………………………43 综述 过氧化物酶体的脂肪酸B．氧化活性缺陷的相关疾病及B。氧化活 性的测定……………………………………………………………45 致谢…………………………………………………………………………．58 个人简历……………………………………………………………………59 中文摘要 静态注射化学发光法测定氧化酶活性的研究及应用 摘 要 目的：氧化酶是一类催化底物氧化生成过氧化氢的酶，包括葡萄糖氧 化酶和脂酰辅酶A氧化酶等，可通过检测其单位时间内H202的生成量测 得其活性。因此，可利用分析速度快、仪器设备简单、灵敏度高、线性范 围宽的化学发光法测定H202含量，反映氧化酶的活性。但目前，大多采 用流动注射化学发光法，试剂消耗量较大，限制了此方法在小样品酶活性 测定中的应用。因静态注射化学发光分析法，除了有前面提到的化学发光 法的特点外，又有试剂用量小的优点，所以，本实验拟建立静态注射化学 发光分析法，用于测定样品量较小、活性较低的氧化酶样本。 水溶性好、光量子效率高的鲁米诺是常用的化学发光试剂。已有使用 对碘苯酚增强的鲁米诺．过氧化氢．辣根过氧化物酶化学发光体系，测定痕 量的辣根过氧化物酶的报道。 基于以上原因，本文将对碘苯酚增强的鲁米诺．过氧化氢．辣根过氧化 物酶化学发光体系与氧化酶反应偶联，用静态注射法测定酶促反应中 H202的生成量，建立测定葡萄糖氧化酶活性和脂酰辅酶A氧化酶活性的 新方法。并分别用于蜂蜜中葡萄糖氧化酶活性的测定，以及正常、2型糖 尿病、单纯胰岛素抵抗的大鼠肝脏、心肌、脑组织的脂酰辅酶A氧化酶 活性的测定。 方法：采用两步法测定氧化酶的活性，即酶促反应和化学发光反应 第一部分：葡萄糖氧化酶活性测定 第一步：葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化，产生H202 向反应容器中加入20山反应体系(含葡萄糖，O．1m01／L磷酸钾缓 冲液)，加入l Opl待测酶活性的样品溶液启动反应并计时。反应在35℃ 下进行。 第二步：经鲁米诺化学发光反应，测定第一步中生成的H202量 上述酶促反应一定时间后，立即将反应容器转移至IFFS．A型多功 能化学发光检测器的闭光样品室内，用注射器取鲁米诺发光液400山(含 中文摘要 氧化酶催化反应的同时启动发光反应(40℃下进行)，在光电倍增管负 高压400V的条件下，记录化学发光响应信号，以其峰高为相对发光 强度。根据H202标准曲线求出化学发光强度